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鮑肌肉萎縮癥病毒染料法熒光定量PCR試劑盒

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產(chǎn)品型號50次

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海

更新時間:2020-07-20 15:08:02瀏覽次數(shù):628次

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供貨周期 一周 規(guī)格 50T
貨號 XY-0019 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
主要用途 熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。
鮑肌肉萎縮癥病毒染料法熒光定量PCR試劑盒*在福建東山發(fā)現(xiàn)并在之后的幾年里反復(fù)爆發(fā)病害。研究通過混養(yǎng)感染的方式將雜交 鮑苗與注射該病毒的雜色鮑混養(yǎng),結(jié)果表明,混養(yǎng)的方式可以是雜交鮑幼苗發(fā)病并致死, 且感染 5 天其死亡率高達(dá) 100%。

鮑肌肉萎縮癥病毒染料法熒光定量PCR試劑盒

Abalone Shriveling Syndrome-associated Virus,AbSV

產(chǎn)品及特點(diǎn)

鮑肌肉萎縮癥病毒(Abalone Shriveling Syndrome-associated Virus,AbSV) *在福建東山發(fā)現(xiàn)并在之后的幾年里反復(fù)爆發(fā)病害。研究通過混養(yǎng)感染的方式將雜交 鮑苗與注射該病毒的雜色鮑混養(yǎng),結(jié)果表明,混養(yǎng)的方式可以是雜交鮑幼苗發(fā)病并致死, 且感染 5 天其死亡率高達(dá) 100%。 該病毒作為一種已經(jīng)被確定的鮑病病原,*爆發(fā) 后常有發(fā)病報道,且損失都很嚴(yán)重,幾乎是毀滅性的,但是對于它的流行規(guī)律還沒有相 關(guān)報道,因此鮑肌肉萎縮癥病毒的快速準(zhǔn)確鑒定對該病的預(yù)防和檢疫有著重要作用,為 此本公司開發(fā)了簡單快捷的鮑肌肉萎縮癥病毒染料法熒光定量 PCR 檢測試劑盒,它具 有下列特點(diǎn):

1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。

2. 根據(jù)鮑肌肉萎縮癥病毒保守序列設(shè)計的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。

3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。

4. 一管式熒光定量 PCR 檢測,避免后續(xù)污染。

5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。

6. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。

鮑肌肉萎縮癥病毒染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分

 

編號

成分

規(guī)格

試劑一

2×PCR MagicMix

0.5 mL(棕色)

試劑二

熒光 PCR 模板稀釋液

1 mL(黃蓋)

試劑三

鮑肌肉萎縮癥病毒 PCR 引物混合液

100 μL(白蓋)

試劑四

鮑肌肉萎縮癥病毒 PCR 陽性對照

(1×10E8 拷貝/μL)

50 μL(紅蓋)

試劑五

DNA 病毒裂解液試用裝

15 次(9 mL)

試劑六

使用手冊

1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸、-20℃保存,有效期一年。

自備試劑 DNA 模板、10×ROX(根據(jù)機(jī)型決定,具體見使用方法)。

使用方法 一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)

1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬 不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原, 本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 段作為陽性對 照。

2. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。

4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得), 充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分 震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。 二、樣品 DNA 的制備

8. 如果有 N 個樣品,必須設(shè)置 N+2 個提取,多出的一個是 PC(樣品制備陽性對照), 一個是 NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?10μL 上步制備的 PCR 陽性對照的第 4 號(濃度為 1×10E4 拷貝/μL,10μL 相當(dāng)于 1 萬拷貝)或第 5 號(濃度為 1×10E5 拷貝/μL,10μL 相當(dāng)于 10 萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求 的體積一樣,以此作為 PC。另外用水作為 NC。如果每次制備需要 200μL 樣品, 則 PC 和 NC 的體積也必須是 200μL。

9. 用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。本 試劑盒免費(fèi)贈送 15 次一管式病毒 DNAout,其使用手冊可從本公司網(wǎng)站通過搜索產(chǎn)品名稱一管式病毒DNAout或產(chǎn)品編號3674下載。 三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20 μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)

10. 如果只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個 樣品,1 個用于 PCR 陰性對照,6 個用于 PCR 陽性對照。如果做 2-3 次重復(fù),則 反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加 2 或 3 倍。

11. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢 后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后后加): 

成分

樣品管 N+2 個

PCR 陰性 對照管

標(biāo)準(zhǔn)曲線 樣品管(2-7 管)

2×qPCR MagicMix (棕色管)

10 μL

10 μL

各 10 μL

鮑肌肉萎縮癥病毒PCR 引 物混合液(白蓋)

2 μL

2 μL

各 2 μL

自備 10×ROX (見注)

2 μL

2 μL

各 2 μL

待測樣品 DNA 模板

6 μL

不加

不加

第 7 步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣 品稀釋液(2-7 號)

不加

不加

各 6μL(2 號樣到 2 號管,3 號樣到 3 號管…)

12. 蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR(具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行 優(yōu)化)。 過程 溫度 時間 預(yù)變性 92℃ 5 分鐘 PCR 反應(yīng) (30 個循環(huán)) 94℃ 60 秒 50℃ 60 秒 72℃ 60 秒

13. 數(shù)據(jù)采集 具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合 DNA 時, 大吸收光譜在 471 nm,結(jié)合 DNA 時的大吸收光譜在 500 nm,大發(fā)射光 譜在 530 nm。信號采集可以設(shè)置在復(fù)性或延伸步驟。

過程

溫度

時間

預(yù)變性

95℃

5 min

 

PCR 反應(yīng)

(35 個循環(huán))

94

60 秒

58℃

60 秒

72℃

60 秒

四、數(shù)據(jù)處理

14. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱 軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。

15. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大于或等 于 40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴(kuò)增曲線,Ct 值應(yīng)該小于或等于 30。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為 陽性。如果在 35-40 之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 Ct 值如果大于或等于 40 則 為陰性,如果小于 40,則為陽性。  

     

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