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伴放線放線桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒

參   考   價: 2490 2290

訂  貨  量: 1-4  根 ≥5  根

具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號50次

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海

更新時間:2020-07-20 15:34:32瀏覽次數(shù):486次

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供貨周期 一周 規(guī)格 50T
貨號 XY-0021 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
主要用途 熒光定量PCR具有更高的擴增效率、更高的擴增靈敏度、更高的擴增特異性。 放這段不
伴放線放線桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒,根據(jù)其理化性質(zhì)分 α、β、γ、未分類皰疹病毒四個亞科。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛,可感染人類和其他脊椎動物。在自然界廣泛存在,主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織,例如:皮膚、粘膜和神經(jīng)組織。

伴放線放線桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒

Actinobacillus actinomycetemcomitans

產(chǎn)品及特點

伴放線放線桿菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans)是一種革蘭陰性的球桿菌,該細(xì)菌可以引起一些嚴(yán)重的全身感染,越來越多的研究發(fā)現(xiàn)該細(xì)菌還可能引起其他疾病,如心內(nèi)膜炎、心包炎、肺炎、菌血癥、敗血癥、骨髓炎、皮膚感染、尿路感染及各種膿腫等,此外,它還能產(chǎn)生如白細(xì)胞毒素、脂多糖、趨化抑制因子等多種毒力因子,這些毒力因子有利于細(xì)菌在宿主體內(nèi)定植、破壞組織、抑制組織修復(fù)、干擾宿主免疫反應(yīng)等,因此快速檢測伴放線放線桿菌具有重要意義。熒光定量PCR是檢測傳染性疾病的主流技術(shù),本產(chǎn)品就是以染料熒光定量PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測伴放線放線桿菌的試劑盒,它具有下列特點:

1.開即用,用戶只需要提供DNA模板。

2. 特異性高,引物是根據(jù)人伴放線放線桿菌高度保守區(qū)設(shè)計,不會擴增其他細(xì)菌

3.引物和擴增體系經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性比常規(guī)PCR高100倍。

4.提供無傳染性的PCR陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。

5.一管式操作,熒光PCR檢測,不容易產(chǎn)生環(huán)境污染。

6. 產(chǎn)品只能用于科研,試劑盒足夠50次20μL體系的PCR。

伴放線放線桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分

 

編號

成分

規(guī)格

試劑一

2×PCR MagicMix

0.5 mL(棕色)

試劑二

熒光 PCR 模板稀釋液

1 mL(黃蓋)

試劑三

伴放線放線桿菌 PCR 引物混合液

100 μL(白蓋)

試劑四

伴放線放線桿菌 PCR 陽性對照

(1×10E8 拷貝/μL)

50 μL(紅蓋)

試劑五

天凈沙核酸釋放劑試用裝

20次(1mL,綠蓋)

試劑六

使用手冊

1 份

運輸及保存 低溫運輸、-20℃保存,有效期一年。

自備試劑 樣品DNA

使用方法 一、制備標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的DNA段作為陽性對照。

1.標(biāo)記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。

2.用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液,用帶芯槍頭,下同)

3.7號管中加入5 μL 陽性對照(其濃度為10E8拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得10E7拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

4.換槍頭,在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

5.換槍頭,在5號管中加入5 μL 10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

6.重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

 二、樣品 DNA 的制備

7.用自選方法純化樣品的DNA,本產(chǎn)品市場絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。

8. 如果有N個樣品,則需要進行N+2個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、一個用作樣品制備陰性對照管。本試劑盒免費贈送20次免DNA提取的天凈沙核酸釋放劑試用裝,該釋放劑的裂解液可以直接作為PCR模板,省略了DNA提取步驟

9.如果進行定量分析,則標(biāo)記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。如果做定性分析,則6個標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品只選一個做(可以選4號,其余樣品不變)。以下只介紹定量分析的反應(yīng)設(shè)置。

10.標(biāo)記管中下表加入各成分:

成分

樣品管 N+2 個

PCR 陰性 對照管

標(biāo)準(zhǔn)曲線 樣品管(2-7 管)

2×qPCR MagicMix 

10 μL

10 μL

各 10 μL

伴放線放線桿菌 PCR引物混合液

2 μL

2 μL

各 2 μL

自備 10×ROX (見注)

2 μL

2 μL

各 2 μL

N+2個待測樣品DNA模板

6 μL

不加

不加

 自備超純水

 不加

 6 μL

 不加

第 7 步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣 品稀釋液(2-7 號)

不加

不加

各 6μL(2 號樣到 2 號管,3 號樣到 3 號管…)

11.蓋上蓋子后上機,按下面參數(shù)進行PCR(具體PCR參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行優(yōu)化)。

 四、熒光定量PCR反應(yīng)參數(shù)

過程

溫度

時間

預(yù)變性

94

5 min

 

PCR 反應(yīng)

40個循環(huán)

94

0.5 min

50℃

0.5 min(采集 SYBR 通道的 熒光信號)

72℃

0.5 min

延伸

72℃

10 min

四、數(shù)據(jù)處理

12.設(shè)定60-96范圍的融解曲線分析,排除假陽性。

13. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的log值為橫軸,以Ct值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA濃度的log值,推算出其濃度

14. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大于或等 于 40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴增曲線,Ct 值應(yīng)該小于或等于 30。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為 陽性。如果在 35-40 之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實驗的 Ct 值如果大于或等于 40 則 為陰性,如果小于 40,則為陽性。 

     

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