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放線菌屬通用染料法熒光定量 PCR 試劑盒

參   考   價: 2490 2290

訂  貨  量: 1-4  件 ≥5  件

具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號50次

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海

更新時間:2020-07-20 16:22:46瀏覽次數(shù):636次

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供貨周期 一周 規(guī)格 50T
貨號 XY-0024 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
主要用途 熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。
放線菌屬通用染料法熒光定量 PCR 試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒,根據(jù)其理化性質(zhì)分 α、β、γ、未分類皰疹病毒四個亞科。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛,可感染人類和其他脊椎動物。在自然界廣泛存在,主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織,例如:皮膚、粘膜和神經(jīng)組織。

放線菌屬通用染料法熒光定量 PCR 試劑盒

Actinomyces spp

產(chǎn)品及特點(diǎn)

放線菌(Actinomyces spp.) 在自然界分布廣泛,主要以孢子或菌絲狀態(tài)存 在于土壤、空氣和水中,尤其是含水量低、有機(jī)物豐富、呈中性或微堿性的土壤 中數(shù)量多。放線菌是一類極其重要的微生物資源。放線菌與人類的生產(chǎn)和生活 關(guān)系極為密切,廣泛應(yīng)用的抗生素約 70%是各種放線菌所產(chǎn)生。一些種類的放線 菌還能產(chǎn)生各種酶制劑(蛋白酶、淀粉酶、和纖維素酶等)、維生素(B12)和 有機(jī)酸等。此外,放線菌還可用于甾體轉(zhuǎn)化、烴類發(fā)酵、石油脫蠟和污水處理等 方面。少數(shù)放線菌也會對人類構(gòu)成危害,引起人和動植物病害。因此,放線菌與 人類關(guān)系密切,在醫(yī)藥工業(yè)上有重要意義,檢測放線菌具有重要的意義。熒光定 量 PCR 是檢測微生物的主流技術(shù),本產(chǎn)品就是以染料法熒光定量 PCR 技術(shù)為基 礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測放線菌的試劑盒,它具有下列特點(diǎn): 

1. 即開即用,用戶只需要提供 DNA 模板。 

2. 特異性高,引物是根據(jù)人放線菌高度保守區(qū)設(shè)計,不會擴(kuò)增其他細(xì)菌。 

3. 引物和擴(kuò)增體系經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性比常規(guī) PCR 高 100 倍。 

4. 提供無傳染性的 PCR 陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。 

5.一管式操作,熒光 PCR 檢測,不容易產(chǎn)生環(huán)境污染。 

6. 本產(chǎn)品只能用于科研,本試劑盒足夠 50 次 20μL 體系的 PCR。 

放線菌屬通用染料法熒光定量 PCR 試劑盒規(guī)格及成分

 

編號

成分

規(guī)格

試劑一

2×PCR MagicMix

0.5 mL(棕色)

試劑二

熒光 PCR 模板稀釋液

1 mL(亮黃蓋

試劑三

放線菌屬通用 PCR 引物混合液

100 μL(白蓋)

試劑四

放線菌屬通用 PCR 陽性對照 (1×10E8 拷貝/μL) 

50 μL(紅蓋)

試劑五

天凈沙核酸釋放劑試用裝 

20 次(1mL,綠蓋) 

試劑六

使用手冊

1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸、-20℃保存,有效期一年。

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、制備標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。 由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能 污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原, 本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供 DNA 段作為陽性對照。

1. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,用帶芯槍頭, 下同)。

3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(其濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提 供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所 得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所 得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。 二、樣品 DNA 的制備

7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。

8. 如果有 N 個樣品,則需要進(jìn)行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備 陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。本試劑盒免費(fèi)贈送 20 次免 DNA 提取的天凈沙核酸釋放劑試用裝,該釋放劑的裂解液可以直接作為 PCR 模板,省略了 DNA 提取步驟。

三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)

9. 如果進(jìn)行定量分析,則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照,6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。如果做定 性分析,則 6 個標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品只選一個做(可以選 4 號,其余樣品不變)。 以下只介紹定量分析的反應(yīng)設(shè)置。 10. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分: 

成分

樣品管 N+2 個

PCR 陰性 對照管

標(biāo)準(zhǔn)曲線 樣品管(2-7 管)

2×qPCR MagicMix (棕色管)

10 μL

10 μL

各 10 μL

放線菌屬通用 PCR 引物混合液 

2 μL

2 μL

各 2 μL

 自備 10×ROX (見注)  2 μL  2 μL  各 2 μL 

N+2 個待測樣品 DNA 模板

6 μL 

不加 

各 2 μL

自備超純水

不加

6 μL 

不加

第 7 步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣 品稀釋液(2-7 號)

不加

不加

各 6μL(2 號樣到 2 號管,3 號樣到 3 號管…)

11. 蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR(具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同 而自行優(yōu)化)。 四、熒光定量 PCR 反應(yīng)參數(shù) 

過程

溫度

時間

預(yù)變性

94

3min

 

PCR 反應(yīng)

40 個循環(huán))

94

30 sec

60℃ 

60 sec(采集 SYBR 通道的熒 光信號) 

五、數(shù)據(jù)處理

12. 設(shè)定 60℃-96℃范圍的融解曲線分析,排除假陽性。

13. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。

14. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大 于或等于 25。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴(kuò)增曲線,Ct 值應(yīng)該 小于或等于 20。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 25 則為陰性,如果小 于或等于 20 則為陽性。如果在 20-25 之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實驗的 Ct 值如果大于或等于 25 則為陰性,如果小于 25,則為陽性。  

     

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