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當前位置:上海信裕生物科技有限公司>>PCR試劑盒>>PCR-染料法>> 50次非洲馬瘟病毒RT-PCR試劑盒
產(chǎn)品型號50次
品 牌其他品牌
廠商性質(zhì)生產(chǎn)商
所 在 地上海
更新時間:2020-07-21 15:30:33瀏覽次數(shù):599次
聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 一周 | 規(guī)格 | 50T |
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貨號 | XY-0033 | 應用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè) |
主要用途 | 熒光定量PCR具有更高的擴增效率、更高的擴增靈敏度、更高的擴增特異性。 |
非洲馬瘟病毒RT-PCR試劑盒
African Horse Sickness Virus(AHSV)
產(chǎn)品及特點
非洲馬瘟病毒(African Horse Sickness Virus,AHSV)會引起非洲馬瘟,是 一種馬屬動物的急性或亞急性傳染病,該病以發(fā)熱、皮下結(jié)締組織與肺水腫以及 內(nèi)臟出血為特征,只能通過昆蟲傳播。馬對此病的易感性高,病死率高達 95%。 本病發(fā)生有明顯的季節(jié)性和地域性,多見于溫熱潮濕季節(jié),常呈地方流行或暴發(fā) 流行,傳播迅速,因此靈敏快捷的診斷產(chǎn)品具有重要的意義。為此本公司開發(fā)了 本產(chǎn)品,可用于在科研領(lǐng)域快速定量檢測非洲馬瘟病毒。它具有下列特點:
1. 一站式,用戶不需要單獨準備每種成分,包括引物和對照。
2. 根據(jù)非洲馬瘟病毒的保守基因序列設計的引物,具有良好的特異性。
3. 靈敏度可以達到 1000 拷貝/反應。
4. 使用一管式 RT-PCR 技術(shù),RT 和 PCR 兩步在一個試管內(nèi)完成,不需要中間 轉(zhuǎn)移樣品,降低了操作誤差和可能的污染。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研,不能用于臨床。
非洲馬瘟病毒RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分
編號 | 成分 | 規(guī)格 |
試劑一 | 5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer | 200 μL(橘黃蓋) |
試劑二 | MMLV-Taq Mix | 75 μL(紅蓋) |
試劑三 | 超純水 | 1 mL(亮黃蓋) |
試劑四 | 非洲馬瘟病毒 RT-PCR 引物混合液 | 100 μL(白蓋) ) |
試劑五 | 非洲馬瘟病毒 RT-PCR 陽性對 | 50 μL(黃蓋) |
試劑六 | 使用手冊 | 1 份 |
運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分 分開放置,因為其容易污染其他成分,造成假陽性。
自備試劑 樣品 DNA。
使用方法 一、樣品 DNA 的制備
1. 如果有 N 個樣品,必須設置 N+2 個提取,多出的一個是 PC(樣品制備陽性 對照),一個是 NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?10μL 非洲馬瘟病毒 PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液作為制備的陽性對照??梢杂盟鳛橹苽涞年幮?對照。制備所得成為樣品 RNA。
2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提 取試劑盒兼容。
二、設置 RT-PCR 反應(20μL 體系)
3. 如果有 N+2 個樣品,則標記 N+4 個 PCR 管(額外增加的兩個管一個是 RT-PCR 陽性對照,另一個是 RT-PCR 陰性對照)并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分:
成分 | 樣品管 N+2 個 | PCR 陰性 對照管 | 標準曲線 樣品管(2-7 管) |
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer | 各4 μL | 4 μL | 4 μL |
非洲馬瘟病毒 RT-PCR 引物混合液 | 各2 μL | 2 μL | 2 μL |
N+2 個制備的 RNA 樣品 | 12.5 μL | ||
超純水 |
| 12.5 μL |
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非洲馬瘟病毒 RT-PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液 | 12.5 μL | ||
MMLV-Taq Mix | 1.5 μL | 1.5 μL | 1.5 μL |
4. 上機進行 RT-PCR,RT-PCR 反應參數(shù)為:
過程 | 溫度 | 時間 |
逆轉(zhuǎn)錄 | 42℃ | 30 min |
預變性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反應 (35個循環(huán)) | 95℃ | 30 sec |
58℃ | 30 sec | |
72℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 7 min |
5. 瓊脂糖電泳檢測擴增效果。如果陰性對照有擴增產(chǎn)物或陽性對照無擴增產(chǎn)物, 則說明實驗失敗,需要分析實驗失敗的原因。只有在陰性對照沒有擴增產(chǎn)物、 陽性對照必須有預期條帶出現(xiàn),才有必要分析樣品的實驗結(jié)果,如果有預期 片段大小的擴增產(chǎn)物則為陽性,如果無則為陰性。
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