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禽白血病病毒通用RT-PCR試劑盒

Avian Leukosis Virus(ALV)

產(chǎn)品及特點

禽白血病(Avian Leukosis)是由禽白血病病毒（Avian Leukosis Virus， ALV）引起的多種腫瘤性疾病的統(tǒng)稱，這些疾病主要是淋巴白血病，其次是成紅 細(xì)胞白血病等。患雞不但產(chǎn)生淋巴樣腫瘤，其產(chǎn)蛋量還將下降。由于該病以垂直 傳播為主，故難以控制。它還使患雞抵抗力下降后，容易感染多種其它疾病，給 雞群的飼養(yǎng)管理帶來困難，所以禽白血病一直被認(rèn)為是嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)的 重要的禽病之一。禽白血病病毒屬于反錄病毒科禽 C 型反錄病毒群，它還常常污 染禽用疫苗、犬用疫苗，甚至人用疫苗，給生物制品工業(yè)、醫(yī)學(xué)和生物學(xué)研究方 面也造成巨大危害。本產(chǎn)品根據(jù) PCR 原理開發(fā)，可用于科研領(lǐng)域快速檢測禽白血 病病毒。它具有下列特點：

1. 一站式，用于不需要單獨準(zhǔn)備每種成分，包括引物和對照。

2. 根據(jù)禽白血病病毒通用的保守基因序列設(shè)計的引物，具有良好的特異性。

3. 靈敏度可以達到 1000 拷貝/反應(yīng)。

4. 使用一管式 RT-PCR 技術(shù)，RT 和 PCR 兩步在一個試管內(nèi)完成，不需要中間 轉(zhuǎn)移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。

5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研，不能用于臨床。

禽白血病病毒通用RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分 分開放置，因為其容易污染其他成分，造成假陽性。 

自備試劑 樣品RNA

使用方法 一、樣品 RNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品，必須設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性 對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?10μL 禽傳染支氣管炎病毒 通用 RT-PCR 陽性對照的 100 倍稀釋的（稀釋后濃度為 1×10E6 拷貝/μL， 10μL 相當(dāng)于 1 萬拷貝，可以將 10μL 原液加入到 990μL 自備 TE 溶液中， 充分混勻，此為 100 倍稀釋液。）再加上一定量的水作為制備的陽性對照（加 水后其總體積跟樣品一樣，樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求）?？梢杂?水作為制備的陰性對照。制備所得成為樣品 RNA。

2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提 取試劑盒兼容。

二、設(shè)置 RT-PCR 反應(yīng)（20μL 體系）

3. 如果有 N+2 個樣品，則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管（額外增加的兩個管一個是 RT-PCR 陽性對照，另一個是 RT-PCR 陰性對照）并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分：

4. 上機進行 RT-PCR，RT-PCR 反應(yīng)參數(shù)為:

5. 瓊脂糖電泳檢測擴增效果。如果陰性對照有擴增產(chǎn)物或陽性對照無擴增產(chǎn)物， 則說明實驗失敗，需要分析實驗失敗的原因。只有在陰性對照沒有擴增產(chǎn)物、 陽性對照有預(yù)期擴增產(chǎn)物的情況下，才有必要分析樣品的實驗結(jié)果，如果有 預(yù)期 674bp 大小的擴增產(chǎn)物則為陽性，如果無則為陰性。