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禽致病性大腸桿菌O1血清型PCR試劑盒

Avian Pathogenicity Escherichia coli(APEC)

產(chǎn)品及特點(diǎn)

禽致病性大腸桿菌 O1 血清型（Avian Pathogenicity Escherichia coli， APEC）會(huì)引發(fā)大腸桿菌敗血癥，尤其在冬季發(fā)病率高，死淘率通常在 5%-20%， 嚴(yán)重的可達(dá) 50%，雛雞在夏季也較多發(fā)，病雞精神不振，采食減少，衰弱和死 亡，病雞腹部膨滿，排出黃綠色的稀便，特征性的病變是纖維素性心包炎，氣 囊混濁肥厚，有干酪樣滲出物，肝包膜呈白色混濁，有纖維素性附著物，有時(shí) 可見白色壞死斑，脾充血腫脹，給養(yǎng)殖業(yè)帶來較大的經(jīng)濟(jì)損失，因此禽致病性 大腸桿菌 O1 血清型檢測具有重要的意義。本試劑盒根據(jù)熒光定量 PCR 原理開 發(fā)，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增非洲豬瘟病毒，與其他病原沒有交 叉反應(yīng)。

3. 提供陽性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研。 

禽致病性大腸桿菌O1血清型PCR試劑盒規(guī)格及成分

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對(duì)照需要單獨(dú)放置，不要污染其 他試劑。  

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個(gè)樣品，必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽 性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?0μL 陽性對(duì)照的 10000 倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作 為 PC。另外用水作為 NC。 

2. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)細(xì)菌 DNA 提取試 劑盒兼容。

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對(duì) N+2 個(gè)樣品，在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽性對(duì)照和一個(gè) PCR 陰性 對(duì)照，故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng)。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成分： 

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對(duì)照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無效。對(duì)沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。