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當(dāng)前位置:上海信裕生物科技有限公司>>PCR試劑盒>>PCR-染料法>> 50次犬細(xì)小病毒染料法熒光定量PCR試劑盒
產(chǎn)品型號(hào)50次
品 牌其他品牌
廠商性質(zhì)生產(chǎn)商
所 在 地上海
更新時(shí)間:2020-07-28 16:03:12瀏覽次數(shù):442次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來(lái)自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 一周 | 規(guī)格 | 50T |
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貨號(hào) | XY-0183 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè) |
主要用途 | 熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。 |
犬細(xì)小病毒染料法熒光定量PCR試劑盒
Canine Parvo Virus(CPV)
產(chǎn)品及特點(diǎn)
犬犬細(xì)小病毒(Canine Parvovirus,CPV)在分類(lèi)上屬細(xì)小病毒屬細(xì)小病毒科,是一 種單鏈 DNA 病毒。CPV 是感染犬、貓、狼、狐等動(dòng)物并引起細(xì)小病毒病,感染率高達(dá) 100%,致死率 10-50%。PCR 是目前檢測(cè) CPV 的方法,本產(chǎn)品就是定性 PCR 產(chǎn)品(產(chǎn)品編號(hào) 11-150)基礎(chǔ)上升級(jí)的定量 PCR 檢測(cè)試劑盒,專(zhuān)門(mén)用于定量鑒定檢 測(cè) CPV。本試劑盒具有下列特點(diǎn):
1. 根據(jù) CPV 衣殼蛋白基因 VP2 設(shè)計(jì)的針對(duì) CPV 的 PCR 引物,專(zhuān)一性強(qiáng)。
2. 即開(kāi)即用,用戶只需要提供樣品模板,操作簡(jiǎn)單,定量準(zhǔn)確快速。
3. 一管式熒光定量 PCR 檢測(cè),避免后續(xù)污染。
4. 本試劑盒足夠 100 次 20uL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
5. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
犬細(xì)小病毒染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分
編號(hào) | 成分 | 規(guī)格 |
試劑一 | 2×qPCR MagicMix | 1 mL×2(裝 A 袋) |
試劑二 | 超純水 | 1 mL×2(裝 A 袋) |
試劑三 | 引物 14-15000F | 1 OD(裝 B 袋) |
試劑四 | 引物 14-15000R | 1 OD(裝 B 袋) |
試劑五 | 犬細(xì)小病毒 VP2 基因陽(yáng)性對(duì)照 (10E8copy/μL) | 50 μL(裝 C 袋) |
試劑六 | 使用手冊(cè) | 1 份 |
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸、-20℃保存(A 袋和 B 袋的試劑放樣品準(zhǔn)備區(qū)、C 袋的陽(yáng)性對(duì)照跟 A 袋 和 B 袋的成分分開(kāi)放置),有效期一年。
自備試劑 DNA 模板、10×ROX(根據(jù)機(jī)型決定,具體見(jiàn)使用方法)。
使用方法 一、樣品 DNA 的制備
1. 用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容,也可以選購(gòu)本公司的柱式病毒 DNAout。
二、引物的制備(在樣品制備室進(jìn)行)
2. 按引物標(biāo)簽提示在裝引物干粉的管中直接加入適量的超純水(加入量見(jiàn)引物試管上 的標(biāo)簽),使得兩條引物的濃度均為 10 μM(10pmol/μL),然后各取 110 μL 混合在一起,標(biāo)注為引物混合物,放冰上待用。此引物混合物足夠 100 次 PCR。
三、稀釋陽(yáng)性對(duì)照(以 10E2-10E7 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于陽(yáng)性對(duì)照濃度非常 高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他 成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照, 只提供可以直接使用的長(zhǎng)為 180bp 的 DNA 段作為陽(yáng)性對(duì)照。
3. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
4. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
5. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 本試劑盒提供的 10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,充分震蕩 1 分鐘,得 10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分 震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
7. 換槍頭,從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5 拷貝/ μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
8. 換槍頭,從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中,得 10E4 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放 冰上待用。重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
三、設(shè)置 PCR 反應(yīng)(20 μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)
9. 在 PCR 管中加入下列成分(待測(cè)樣品需要做三次重復(fù),下表只列出一次。樣品管 和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照,并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子 儲(chǔ)存好后后加):
成分 | 樣品 | 陰性對(duì)照 | 陽(yáng)性對(duì)照(2-7 管) |
2×qPCR MagicMix ( | 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
引物混合物 | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
自備 10×ROX (見(jiàn)注) | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
待測(cè)樣品 DNA 模板 | 1-5 μL |
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陽(yáng)性對(duì)照(2-7 號(hào)) | 各 5μL(2 號(hào)樣到 2 號(hào)管,3 號(hào)樣到 3 號(hào)管…) | ||
補(bǔ)水到 | 20 μL | 20 μL | 20 μL |
10. 蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR(可以根據(jù)儀器不同而自行優(yōu)化)。
過(guò)程 | 溫度 | 時(shí)間 |
預(yù)變性 | 94℃ | 2 分鐘 |
PCR 反應(yīng) (40 個(gè)循環(huán)) | 94℃ | 15 秒 |
60℃ | 30 秒 |
11. 數(shù)據(jù)采集 在每個(gè)循環(huán)的第二步進(jìn)行熒光信號(hào)的采集,具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。 本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合 DNA 時(shí),大吸收光譜在 471 nm,結(jié)合 DNA 時(shí)的大吸收光譜在 500 nm,大發(fā)射光譜在 530 nm。
四、數(shù)據(jù)處理
12. 以陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品 濃度的 log 和標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品 DNA 的濃度。
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