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梭狀芽孢桿菌屬通用PCR試劑盒

Clostridium spp.

產(chǎn)品及特點(diǎn)

梭狀芽孢桿菌（Clostridium spp.）屬于孢子菌，在自然界中是一種非常 *的種類。本菌屬細(xì)菌在自然界分布廣泛，常存在于土壤、人和動(dòng)物腸道以 及物中。多為腐物寄生菌，少數(shù)為致病菌，能分泌外毒素和侵襲性酶類， 引起人和動(dòng)物患病。因此快速靈敏檢測(cè)梭狀芽孢桿菌具有重要的意義，本試劑 盒就是為此目的根據(jù) PCR 原理開(kāi)發(fā)，它具有下列特點(diǎn)： 

1. 即開(kāi)即用，用戶只需要提供細(xì)菌 DNA 模板。 

2. 引物經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增梭狀芽苞桿菌 DNA，跟其他微生物 無(wú)交叉反應(yīng)。能檢測(cè)出的梭狀芽苞桿菌包括丁酸梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、新 生兒梭菌、生胞梭菌、艱難梭菌、雙酶梭菌、乙二酸梭菌、索氏梭菌等。 

3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

梭狀芽孢桿菌屬通用PCR試劑盒規(guī)格及成分

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽(yáng)性對(duì)照需要單獨(dú)放置，不要污染其 他試劑。  

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)核酸提取 試劑盒兼容。

2. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要做 N+2 個(gè)提取，包括一個(gè)樣品制備陽(yáng)性對(duì)照和一 個(gè)樣品制備陰性對(duì)照。樣品制備陽(yáng)性對(duì)照是在適量水（取決于試劑盒要求 的樣品起始量）中加 10μL 芽孢桿菌通用 PCR 陽(yáng)性對(duì)照的 10000 倍稀釋 液而得，樣品制備陰性對(duì)照是直接用水。提取結(jié)束后后得到模板 DNA 放 冰上待用。 

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對(duì) N+2 個(gè)樣品，在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè) PCR 陰性 對(duì)照，故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng)。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成分： 

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

三、電泳檢測(cè)

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽(yáng) 性對(duì)照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無(wú)任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無(wú)效。對(duì)沒(méi)有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。