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刺激隱核蟲PCR試劑盒

Cryptocaryon irritans

產(chǎn)品及特點(diǎn)

刺激隱核蟲（Cryptocaryon irritans） 又叫海水小瓜蟲，屬原生動(dòng)物門、 纖毛亞門、寡膜纖毛綱、膜口亞綱、膜口目、凹口科、隱核蟲屬的一種。刺激 隱核蟲常寄生于海水硬骨魚類的皮膚、鰓的上皮下，可引起魚類的傳染性疾病。 刺激隱核蟲病是海水魚養(yǎng)殖中危害大的寄生蟲性疾病,又被漁民稱為海水魚 白點(diǎn)病。目前,刺激隱核蟲病尚不屬于國(guó)家規(guī)定的水生動(dòng)物疫病和人魚共患疾病, 但因其傳染性較強(qiáng),可感染尖吻鱸、紫紅笛鯛、東方鲀、大黃魚、美國(guó)紅魚、鱸 魚、金鯧、石斑魚、藍(lán)子魚、白胡椒鯛、真鯛、黑鯛、平鯛、紅鰭笛鯛等各個(gè) 品種的海水網(wǎng)箱養(yǎng)殖魚類,危害嚴(yán)重時(shí)甚至形成暴發(fā)性流行的水生動(dòng)物疫病,特 別是魚苗,感染率和死亡率均可達(dá) 100%,造成重大的經(jīng)濟(jì)損失，因此刺激隱核蟲 的快速檢測(cè)具有重要的意義。本試劑盒根據(jù) PCR 原理開發(fā)，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供細(xì)菌 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增刺激隱核蟲。

3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

刺激隱核蟲PCR試劑盒規(guī)格及成分

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽(yáng)性對(duì)照需要單獨(dú)放置，不要污染其 他試劑。  

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)核酸提取 試劑盒兼容。

2. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要做 N+2 個(gè)提取，包括一個(gè)樣品制備陽(yáng)性對(duì)照和一 個(gè)樣品制備陰性對(duì)照。樣品制備陽(yáng)性對(duì)照是在適量水（取決于試劑盒要求 的樣品起始量）中加 10μL 芽孢桿菌通用 PCR 陽(yáng)性對(duì)照的 10000 倍稀釋 液而得，樣品制備陰性對(duì)照是直接用水。提取結(jié)束后后得到模板 DNA 放 冰上待用。 

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對(duì) N+2 個(gè)樣品，在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè) PCR 陰性 對(duì)照，故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng)。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成分： 

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

三、電泳檢測(cè)

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽(yáng) 性對(duì)照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無效。對(duì)沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。