人乳頭瘤病毒16染料法熒光定量PCR試劑盒 返回列表頁

人乳頭瘤病毒16染料法熒光定量PCR試劑盒

Human Papillomavirus 16(HPV-16)

產(chǎn)品及特點(diǎn)

人乳頭瘤病毒（Human papillomavirus，HPV）是一種屬于乳多空病毒科的乳 頭瘤空泡病毒 A 屬，是球形 DNA 病毒，能引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖。表現(xiàn)為 尋常疣、生殖器疣（尖銳濕疣）等癥狀。 隨著性病中尖銳濕疣的發(fā)病率急速上升和宮 頸癌、肛門癌等的增多，人乳頭瘤病毒感染越來越引起人們的關(guān)注。其中黏膜高危型 HPV-16、18、30、31、33、35、39 與宮頸癌、直腸癌、口腔癌、扁桃體癌等相關(guān)， 其早期檢測(cè)非常重要。本產(chǎn)品就是針對(duì)此需求而建立的一種定量檢測(cè) HPV-16 型病毒 的高靈敏的 PCR 檢測(cè)方法。本試劑盒具有下列特點(diǎn)：

1. 根據(jù) HPV-16 保守區(qū)設(shè)計(jì)的針對(duì) HPV-16 的 PCR 引物，專一性強(qiáng)。

2. 即開即用，用戶只需要提供樣品模板，操作簡(jiǎn)單，定量準(zhǔn)確快速。

3. 一管式熒光定量 PCR 檢測(cè)，避免后續(xù)污染。

4. 本試劑盒足夠 100 次 20uL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。

5. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。 

人乳頭瘤病毒16染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸、-20℃保存(A 袋和 B 袋的試劑放樣品準(zhǔn)備區(qū)、C 袋的陽性對(duì)照分開放置)， 有效期一年。 

自備試劑   DNA 模板、10×ROX（根據(jù)機(jī)型決定，具體見使用方法）。 

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。

二、引物的制備（在樣品制備室進(jìn)行）

2. 按引物標(biāo)簽提示在裝引物干粉的管中直接加入適量的超純水（加入量見引物試管上 的標(biāo)簽），使得兩條引物的濃度均為 10 μM（10 pmol/μL），然后各取 50 μL 混合在一起，標(biāo)注為引物混合物，放冰上待用。

三、稀釋陽性對(duì)照（以 10E2-10E7 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高， 因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成 分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照， 只提供可以直接使用的長(zhǎng)為 126bp 的 DNA 段作為陽性對(duì)照。

3. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

4. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。

5. 先將本試劑盒提供的陽性對(duì)照用超純水 10 倍梯度稀釋到 10E8 拷貝/μL。放冰上 待用。

6. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分 鐘，得 10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。

7. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分 震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。

8. 換槍頭，從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5 拷貝/ μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。

9. 換槍頭，從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中，得 10E4 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放 冰上待用。重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。

三、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（20 μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）

10. 在 PCR 管中加入下列成分（待測(cè)樣品需要做三次重復(fù)，下表只列出一次。樣品管 和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對(duì)照，并且陽性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子 儲(chǔ)存好后后加）： 

11. 蓋上蓋子后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR（具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行 優(yōu)化）。 

12. 數(shù)據(jù)采集 具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合 DNA 時(shí)， 大吸收光譜在 471 nm，結(jié)合 DNA 時(shí)的大吸收光譜在 500 nm，大發(fā)射光 譜在 530 nm。

13. 根據(jù)所用熒光定量 PCR 儀器的方法進(jìn)行溶解曲線分析（每種儀器可能稍微有所不 同），排除非特異擴(kuò)增。

四、數(shù)據(jù)處理