上海信裕生物科技有限公司
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日本腦炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

參   考   價(jià): 3990 3790

訂  貨  量: 1-4  件 ≥5  件

具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號(hào)50次

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海

更新時(shí)間:2020-08-05 16:18:42瀏覽次數(shù):399次

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供貨周期 一周 規(guī)格 50T
貨號(hào) XY-0427 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
主要用途 熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。
日本腦炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒,根據(jù)其理化性質(zhì)分 α、β、γ、未分類皰疹病毒四個(gè)亞科。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛,可感染人類和其他脊椎動(dòng)物。在自然界廣泛存在,主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織,例如:皮膚、粘膜和神經(jīng)組織。

日本腦炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

Japanese Encephalitis Virus(JEV)

產(chǎn)品及特點(diǎn)

日本腦炎又稱為流行性腦炎。該病是日本腦炎病毒(Japanese Encephalitis Virus)引起的影響中樞神經(jīng)的急性傳染病。在亞洲與東南美洲日本腦炎流行十分 普遍。在美國(guó)的塞班島與澳洲大陸等地區(qū)也出現(xiàn)了日本腦炎的病例。日本腦炎是 自然病毒引起,人、動(dòng)物與大多數(shù)家禽都可能感染日本腦炎。在 10 歲以下,尤 其是 2-6 歲的兒童中傳播廣。主要的癥狀為發(fā)燒、抽筋與深度昏迷。超過一半 的存活兒童,在發(fā)病一年后仍有腦波之異常。四分之三的存活者,在發(fā)病五年后, 仍然有行為或精神狀態(tài)方面之異常。因此快速靈敏診斷具有重要意義。本產(chǎn)品就 是以探針法熒光定量 RT-PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測(cè)日本腦炎病毒的試劑盒, 它具有下列特點(diǎn):

1. 即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。

3. 提供陽性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 特異性高,引物是根據(jù)日本腦炎病毒高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他病毒的 RNA 發(fā)生交叉反應(yīng)。

5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研。

日本腦炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號(hào)

成分

規(guī)格

試劑一

2×Probe qRT-PCR MagicMix

500 μL(本色蓋) 

試劑二

熒光 PCR 模板稀釋液

 1 mL(黃蓋)

試劑三

日本腦炎病毒 qRT-PCR 引物混 合液

100 μL(白蓋)

試劑四

日本腦炎病毒 qRT-PCR 探針

50 μL(棕色管)

試劑五日本腦炎病毒探針法 qRT-PCR 陽性對(duì) 照(1×10E8 拷貝/μL) 50 μL(黃蓋)
試劑 天凈沙核酸釋釋劑(試用裝)20 次(1mL,綠蓋) 

試劑

使用手冊(cè)

1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為 12 個(gè)月。 

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)。 由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能 污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原, 本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,只提供無傳染性的 DNA 段作為陽性對(duì)照。

1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 RT-PCR 模板稀釋液,用帶芯槍 頭,下同)。

3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(試劑盒提供),充分震 蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所 得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所 得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品 RNA 的制備

7. 如果有 N 個(gè)樣品,設(shè)置 N+2 個(gè)提取,多出的一個(gè)是 PC(樣品制備陽性 對(duì)照),一個(gè)是 NC(樣品制備陰性對(duì)照)??梢杂?10μL 陽性對(duì)照的 10000 倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為 PC。另外用水作為 NC。

8. 用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù) DNA 提取試劑盒兼容。

三、Probe qRT-PCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè) 用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用 水做模板),1 個(gè)用于 PCR 陽性對(duì)照(用第 4 號(hào)管的陽性對(duì)照稀釋液做模 板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

10. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè) 置完畢后才設(shè)置陽性對(duì)照,并且陽性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好 后后加): 

成分

樣品管 N+2 個(gè)

PCR 陰性 對(duì)照管

標(biāo)準(zhǔn)曲線 樣品管(2-7 管)

2×Probe qRT-PCR MagicMix

10 μL

10 μL

10 μL

日本腦炎病毒 qRT-PCR 探針

 各 1 μL

 1 μL

 各 2 μL

 日本腦炎病毒探針法 qRT-PCR 引物混合液各 2 μL2 μL 各2 μL

待測(cè)樣品 RNA 模板

7 μL

 

 

超純水  7 μL 
 第 7 步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液 (2-7 號(hào))   各 7 μL(2 號(hào) 樣到 2 號(hào)管,3 號(hào)樣到 3 號(hào) 管…)

11. 蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR:

過程

溫度

時(shí)間

 逆轉(zhuǎn)錄42℃30 min
 預(yù)變性 95℃5 min

 

qRT-PCR 反應(yīng) (40 個(gè)循環(huán))

93℃

0.5 min

55℃ 0.5 min(采集 FAM 通道的熒光 信號(hào))

72℃

0.5 min

 后延伸 72℃ 10 min

 

五、數(shù)據(jù)處理

12. 如果把本試劑盒用于定量檢測(cè),則以陽性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值 為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 RNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。

13. 如果把本試劑盒用于定性檢測(cè),只判斷陽性或陰性,則陰性對(duì)照 Ct 必須大 于或等于 40。陽性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng),有典型擴(kuò)增曲線,Ct 值應(yīng)該 小于或等于 30。對(duì)待測(cè)樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小 于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性,如果小于 35,則為陽性。

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