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錦鯉皰疹病毒Sph基因PCR試劑盒

Koi Herpesvirus(KHV)

產(chǎn)品及特點(diǎn)

錦鯉皰疹病毒（Koi herpesvirus），簡(jiǎn)稱(chēng) KHV。因其主要是由 DNA 類(lèi) 皰疹濾過(guò)性病毒感染所引起，又名鯉魚(yú)腎炎及鰓壞疽病毒，亞洲地區(qū)于 2004 年也被報(bào)導(dǎo)感染錦鯉皰疹病毒。我國(guó)將其列為二類(lèi)動(dòng)物疫病，是世界動(dòng)物衛(wèi)生 組織（OIE）必須申報(bào)的疾病。因此對(duì)錦鯉皰疹病毒進(jìn)行快速靈敏的診斷具有重 要的意義。本產(chǎn)品就是為此目的根據(jù) PCR 原理開(kāi)發(fā)的產(chǎn)品，針對(duì)聚合酶基因 (Sph)進(jìn)行 PCR 檢測(cè)，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開(kāi)即用，用戶(hù)只需要提供 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化，專(zhuān)一性強(qiáng)，只擴(kuò)增錦鯉皰疹病毒 Sph 基因。

3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

錦鯉皰疹病毒Sph基因PCR試劑盒規(guī)格及成分

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽(yáng)性對(duì)照需要單獨(dú)放置，不要污染其 他試劑。 

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個(gè)樣品，必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽(yáng) 性對(duì)照），一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對(duì)照）。可以用 10μL 陽(yáng)性對(duì)照的 1 千倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此 作為 PC。另外用水作為 NC。

2. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)寄生蟲(chóng) DNA 提取 試劑盒兼容。 

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對(duì) N+2 個(gè)樣品，在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè) PCR 陰性 對(duì)照，故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng)。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成分： 

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

三、電泳檢測(cè)

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽(yáng) 性對(duì)照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無(wú)任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無(wú)效。對(duì)沒(méi)有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。