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乳酸桿菌屬通用染料法熒光定量PCR試劑盒返回列表頁

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產(chǎn)品型號50次

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廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所在地上海

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更新時間：2020-08-05 17:07:08瀏覽次數(shù)：436次

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供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號	XY-0437	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。

供貨周期

一周

規(guī)格

50T

貨號

XY-0437

應(yīng)用領(lǐng)域

醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)

主要用途

熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。

乳酸桿菌屬通用染料法熒光定量PCR試劑盒

Lactococcus spp.

產(chǎn)品及特點

乳酸桿菌是可使葡萄糖等糖類分解為乳酸的各種細(xì)菌的總稱。乳酸菌是一種無芽孢的桿菌，屬革蘭氏陽性菌，厭氧性呼吸。廣泛分布于自然界，有些菌株是人和動物口腔、腸道及陰道的正常菌群之一，很少致病，除極偶爾引起亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎外，對人基本無害。寄生于口腔的乳酸桿菌在齲齒發(fā)生中起重要作用。一般認(rèn)為寄生于腸道和陰道的乳酸桿菌對機(jī)體有保護(hù)作用某些乳桿菌如嗜酸性乳桿菌、保加利亞乳桿菌，常用于飲料的發(fā)酵工業(yè)。本公司開發(fā)乳酸桿菌屬通用染料法熒光定量 PCR 試劑盒，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板。

2. 引物根據(jù)乳酸桿菌屬專一區(qū)設(shè)計，特異性高。

3. 熒光定量 PCR 檢測，比常規(guī) PCR 更加靈敏。

4. 一管式閉管操作，降低了交叉污染。

5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。

6. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

乳酸桿菌屬通用染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號	成分	規(guī)格
試劑一	2×PCR MagicMix	500μL（棕色）
試劑二	熒光 PCR 模板稀釋液	1 mL（黃蓋）
試劑三	乳酸桿菌屬通用染料法 qPCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑四	乳酸桿菌屬通用染料法 qPCR 陽性對照(1×10E8 拷貝/μL)	50μL（紅蓋）
試劑五	天凈沙核酸釋放劑試用裝	20 次（1mL，綠蓋））
試劑六	使用手冊	1 份

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、制備標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的 DNA 段作為陽性對照。

1. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同）。

3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（其濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品 DNA 的制備

7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。

8. 如果有 N 個樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。

三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）

9. 如果進(jìn)行定量分析，則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照，6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。如果做定性分析，則 6 個標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品只選一個做（可以選 4 號，其余樣品不變）。以下只介紹定量分析的反應(yīng)設(shè)置。

10. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分：

成分	樣品管 N+2 個	PCR 陰性對照管	標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品管（2-7 管）
2×qPCR MagicMix	10 μL	10 μL	各 10 μL
乳酸桿菌屬通用染料法 qPCR 引物混合液	2 μL	2 μL	各 2 μL
自備 10×ROX (見注)	2 μL	2 μL	各 2 μL
N+2 個待測樣品 DNA 模板	6 μL
自備超純水		6 μL
第 7 步所得 PCR 陽性對照稀釋液（2-7 號）			各 6μL（2 號樣到 2 號管，3 號樣到 3 號管…）

11. 蓋上蓋子后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR（具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行優(yōu)化）。

四、熒光定量 PCR 反應(yīng)參數(shù)

過程	溫度	時間
預(yù)變性	95℃	5 min
PCR 反應(yīng) （40 個循環(huán)）	95℃	15 sec
PCR 反應(yīng) （40 個循環(huán)）	60℃	1 min（采集 SYBR 通道的熒光信號）

五、數(shù)據(jù)處理

12. 設(shè)定 60℃-96℃范圍的熔解曲線分析，排除假陽性。

13. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度。

14. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照 Ct 必須大于或等于 32。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長，有典型擴(kuò)增曲線，Ct 值應(yīng)該小于或等于 30。對待測樣品，如果其 Ct 大于或等于 32 則為陰性，如果小于或等于 30 則為陽性。如果在 30-32 之間，則重復(fù)一次。重復(fù)實驗的 Ct 值如果大于或等于 32 則為陰性，如果小于 30，則為陽性。