供貨周期 |
一周 |
規(guī)格 |
50T |
貨號 |
XY-0640 |
應(yīng)用領(lǐng)域 |
醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè) |
主要用途 |
熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。 |
輪狀病毒通用RT-PCR試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒,根據(jù)其理化性質(zhì)分 α、β、γ、未分類皰疹病毒四個(gè)亞科。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛,可感染人類和其他脊椎動(dòng)物。在自然界廣泛存在,主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織,例如:皮膚、粘膜和神經(jīng)組織。
輪狀病毒通用RT-PCR試劑盒
Rotavirus
產(chǎn)品及特點(diǎn)
輪狀病毒(Bovine Rotavirus, BRAV)是一種 RNA 病毒,該病毒會(huì)引起輪狀 病毒病,是一種急性胃腸道傳染病,以精神委頓、厭食、嘔吐、腹瀉、脫水為主 要特征,對養(yǎng)殖業(yè)造成較大經(jīng)濟(jì)損失,因此靈敏快捷的診斷產(chǎn)品具有重要的意義。 本產(chǎn)品基于 PCR 原理開發(fā),可用于科研領(lǐng)域快速檢測輪狀病毒。它具有下列特 點(diǎn):
1. 一站式,用于不需要單獨(dú)準(zhǔn)備每種成分,包括引物和對照。
2. 根據(jù)輪狀病毒的保守基因序列設(shè)計(jì)的引物,具有良好的特異性。
3. 靈敏度可以達(dá)到 1000 拷貝/反應(yīng)。
4. 使用一管式 RT-PCR 技術(shù),RT 和 PCR 兩步在一個(gè)試管內(nèi)完成,不需要中間 轉(zhuǎn)移樣品,降低了操作誤差和可能的污染。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研,不能用于臨床。
輪狀病毒通用RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分
編號 | 成 份 | 規(guī)格 |
試劑一 | 5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer | 200 μL(橘黃蓋) |
試劑二 | MMLV-Taq Mix | 75 μL(紅蓋) |
試劑三 | 超純水 | 1 mL(亮黃蓋) |
試劑四 | 輪狀病毒通用 RT-PCR 引物 混合液 | 100 μL(白蓋) |
試劑五 | 輪狀病毒通用 RT-PCR 陽性 對照(1×10E8 拷貝/μL) | 50 μL(黃蓋) |
試劑六 | 天凈沙核酸釋放劑(試用裝) | 20 次(1mL,綠蓋) |
試劑七 | 使用手冊 | 1 份) |
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為 12 個(gè)月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分 分開放置,因?yàn)槠淙菀孜廴酒渌煞?,造成假陽性?nbsp;
自備試劑 樣品 RNA
使用方法 一、樣品 RNA 的制備
1. 如果有 N 個(gè)樣品,必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取,多出的一個(gè)是 PC(樣品制備陽性 對照),一個(gè)是 NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?10μL 流行性出血熱病毒 PCR 陽性對照的 100 倍稀釋作為制備的陽性對照;用水作為制備的陰性對照。 制備所得成為樣品 RNA。
2. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 RNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提 取試劑盒兼容。
二、設(shè)置 RT-PCR 反應(yīng)(20μL 體系)
3. 如果有 N+2 個(gè)樣品,則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管(額外增加的兩個(gè)管一個(gè)是 RT-PCR 陽性對照,另一個(gè)是 RT-PCR 陰性對照)并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分:
成分 | 樣品 | 陽性對照 | 陰性對照 |
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer | 各 4 μL | 4 μL | 4 μL |
輪狀病毒通用 RT-PCR 引物混合液 | 各2μL | 2μL | 2μL |
N+2 個(gè)制備的 RNA 樣品 | 各12.5 μL | | |
超純水 | | 12.5 μL | |
輪狀病毒通用 RT-PCR 陽性對照 的 100 倍稀釋液 | L | | 12.5 μL |
MMLV-Taq Mix | 1.5 μL | 1.5 μL | 1.5 μL |
4. 上機(jī)進(jìn)行 RT-PCR,RT-PCR 反應(yīng)參數(shù)為:
過程 | 溫度 | 時(shí)間 |
逆轉(zhuǎn)錄 | 42℃ | 30 min |
預(yù)變性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反應(yīng) (35 個(gè)循環(huán)) | 95℃ | 30 sec |
55℃ | 30 sec |
延伸 | 72℃ | 7 min |
5. 瓊脂糖電泳檢測擴(kuò)增效果。如果陰性對照有擴(kuò)增產(chǎn)物或陽性對照無擴(kuò)增產(chǎn)物, 則說明實(shí)驗(yàn)失敗,需要分析實(shí)驗(yàn)失敗的原因。只有在陰性對照沒有擴(kuò)增產(chǎn)物、 陽性對照有 122bp 預(yù)期的擴(kuò)增產(chǎn)物的情況下,才有必要分析樣品的實(shí)驗(yàn)結(jié)果, 如果有擴(kuò)增產(chǎn)物則為陽性,如果無則為陰性。