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當(dāng)前位置:上海信裕生物科技有限公司>>PCR試劑盒>>PCR-染料法>> 50次天花病毒染料法熒光定量PCR試劑盒
產(chǎn)品型號50次
品 牌其他品牌
廠商性質(zhì)生產(chǎn)商
所 在 地上海
更新時間:2020-08-14 16:07:57瀏覽次數(shù):547次
聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 一周 | 規(guī)格 | 50T |
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貨號 | XY-0734 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè) |
主要用途 | 熒光定量PCR具有更高的擴增效率、更高的擴增靈敏度、更高的擴增特異性。 |
天花病毒染料法熒光定量PCR試劑盒
Variola Virus(VARV)
產(chǎn)品及特點
天花病毒(Variola Virus,VARV) 會引起天花,是一種烈性傳染病,感染天花病毒后的潛伏期平均約為12天,感染后的初期癥狀包括:高燒、疲累、頭疼、心跳加速及背痛。2-3天后,會有典型的天花紅疹明顯地分布在臉部、手臂和腿部。在發(fā)疹的初期,還會有淡紅色的塊狀面積伴隨疹子而出現(xiàn)。病灶在幾天之后開始化膿,直到第2個星期開始結(jié)痂。接下來的3-4周慢慢發(fā)展成疥癬,然后慢慢剝落。該病毒會對人體健康有較大影響,因此天花病毒的快速準確鑒定對該病的預(yù)防和檢疫有著重要作用,為此本公司開發(fā)了簡單快捷的天花病毒染料法熒光定量PCR檢測試劑盒,它具有下列特點:
1.即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2.根據(jù)天花病毒保守序列設(shè)計的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3.靈敏度可以達到幾百拷貝/反應(yīng)。
4.一管式熒光定量PCR檢測,避免后續(xù)污染。
5.本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
6.本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
天花病毒染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分
編號 | 成分 | 規(guī)格 |
試劑一 | 2×PCR MagicMix | 500μL(棕色) |
試劑二 | 熒光 PCR 模板稀釋液 | 1 mL(黃蓋) |
試劑三 | 天花病毒PCR 引物混 合液 | 100 μL(白蓋) |
試劑四 | 天花病毒PCR 陽性對 照(1×10E8 拷貝/μL) | 50μL(紅蓋) |
試劑五 | DNA病毒裂解液(試用裝) | 15次(9 mL) |
試劑六 | 使用手冊 | 1 份 |
運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,保存期限為 12 個月。
自備試劑 樣品 DNA。
使用方法
一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于陽性對照濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千 萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病 原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 段作為陽 性對照。
2. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得), 充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分 震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
8. 如果有 N 個樣品,必須設(shè)置 N+2 個提取,多出的一個是 PC(樣品制備陽性對照), 一個是 NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?10μL PCR 陽性對照的 10000 倍稀釋 的(稀釋后濃度為 1×10E4 拷貝/μL,10μL 相當(dāng)于 1 萬拷貝,可以將 10μL 原 液加入到 990μL 自備 TE 溶液中,充分混勻,此為 100 倍稀釋液。再取 10μL 此 稀釋液加入到 990μL 自備 TE 溶液中,充分混勻,此為 10000 倍稀釋液)再加 上一定量的水作為制備的陽性對照(加水后其總體積跟樣品一樣,樣品體積多少取 決于所用試劑盒的要求)??梢杂盟鳛橹苽涞年幮詫φ?。制備所得成為樣品 DNA。
9. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼 容。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20 μL 體系,在樣品制備室進行)
10. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上 步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照,6 個用于標準曲線。如果做定性 分析,并且只做 1 次重復(fù),則標記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于 PCR 陽性對照(用 第 4 號陽性對照稀釋液,濃度為 14810 拷貝/μL)。下面只描述定量分析的步驟, 定性分析只是把 6 個標曲反應(yīng)縮減成 1 個,其余不變。
11. 在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢 后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后后加):
成分 | 樣品管 N+2個 | PCR陰性對照管 | PCR陽性 對照管(2-7管) |
2×qPCR MagicMix (棕色管) | 10 μL | 10 μL | 各10 μL |
天花病毒PCR 引物混合液(白蓋) | 2 μL | 2 μL | 各2 μL |
自備10×ROX (見注) | 2 μL | 2 μL | 各2 μL |
N+2待測樣品DNA模板 | 6 μL | 不加 | 不加 |
第7步所得PCR陽性對照 稀釋液(2-7號) | 不加 | 不加 | 各6μL(2號樣到2號管,3號樣到3號管…) |
12.蓋上蓋子后上機,按下面參數(shù)進行PCR(具體PCR參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行優(yōu)化)。
過程 | 溫度 | 時間 |
預(yù)變性 | 96℃ | 5分鐘 |
PCR反應(yīng) (30個循環(huán)) | 94℃ | 60 秒 |
54℃ | 60 秒 | |
76℃ | 60 秒 |
13.數(shù)據(jù)采集
具體操作按所用儀器推薦的流程進行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合DNA時,大吸收光譜在471 nm,結(jié)合DNA時的大吸收光譜在500 nm,大發(fā)射光譜在530 nm。信號采集可以設(shè)置在復(fù)性或延伸步驟。
四、數(shù)據(jù)處理
14.如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的log值為橫軸,以Ct值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的Ct值從標準曲線上推算出樣品DNA濃度的log值,再推算出其濃度。
15.如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照Ct必須大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴增曲線,Ct值應(yīng)該小于或等于30。對待測樣品,如果其Ct大于或等于40則為陰性,如果小于或等于35則為陽性。如果在35-40之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實驗的Ct值如果大于或等于40則為陰性,如果小于40,則為陽性。
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