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供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號	XY-0768	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴增效率、更高的擴增靈敏度、更高的擴增特異性。

雞源性成分單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒

產(chǎn)品簡介：

熒光定量 PCR 是檢測傳染性疾病的主流技術(shù)，本產(chǎn)品就是以染料法熒光定量 PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測雞源性成分單重?zé)晒?/span>的試劑盒。

雞源性成分單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒產(chǎn)品特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供病毒 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過優(yōu)化，靈敏性高。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 特異性高，引物是根據(jù)雞源性成分單重?zé)晒?/span>高度保守的 VP1 區(qū)設(shè)計。

5. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

產(chǎn)品名稱	方法	規(guī)格	價格
雞源性成分單重?zé)晒?/span>LAMP試劑盒	LAMP	50次	2490元
雞源性成分單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒	PCR	50次	1490元
雞源性成分單重?zé)晒?/span>染料法PCR試劑盒	染料法	50次	2490元
雞源性成分單重?zé)晒?/span>探針法PCR試劑盒	探針法	50次	3490元

雞源性成分單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒包裝規(guī)格及成分：

編號	成分	規(guī)格
試劑一	2×PCR MagicMix	0.5 mL（棕色）
試劑二	熒光 PCR 模板稀釋液	1 mL（黃蓋）
試劑三	雞源性成分單重?zé)晒?/span>PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑四	雞源性成分單重?zé)晒?/span>PCR 陽性對照 (1×10E8 拷貝/μL)	50 μL（紅蓋）
試劑五	DNA 病毒裂解液試用裝	15 次（9 mL）
試劑六	使用手冊	1 份

運輸及保存：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑：DNA 模板

雞源性成分單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒使用方法：

一.稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的 DNA 段作為陽性對照。

1.標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

2.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同）。

3.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

4.換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

5.換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

6.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

二.樣品 DNA 的制備

7.如果有 N 個樣品，必須設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?10μL 上步制備的標準曲線樣品的第 4 號（濃度為 1×10E4 拷貝/μL，10μL 相當于 1 萬拷貝）或第 5 號（濃度為 1×10E5 拷貝/μL，10μL 相當于 10 萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為 PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要 200μL 樣品，則 PC 和 NC 的體積也必須是 200μL。

8.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼容。?

過程	溫度	時間
預(yù)變性	94℃	5 min
PCR 反應(yīng) （35 個循環(huán)）	94℃	0.5 min
	50℃	0.5 min（采集 SYBR 通道的熒光信號）
	72℃	0.5 min
后延伸	72℃	10 min

三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20 μL 體系，在樣品制備室進行）

9.如果只做 1 次重復(fù)，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照，6 個用于標準曲線樣品。如果做 2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加 2 或 3 倍。

10.在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后后加）：

成分	樣品管 N+2 個	PCR 陰性對照管	標準曲線樣品管（2-7 管）
2×qPCR MagicMix （棕色管）	10 μL	10 μL	各 10 μL
雞源性成分單重?zé)晒?/span>PCR 引物混合液（白蓋）	2 μL	2 μL	各 2 μL
自備 10×ROX (見注)	2 μL	2 μL	各 2 μL
待測樣品 DNA 模板	6 μL	不加	不加
第 7 步所得標準曲線樣品稀釋液（2-7 號）	不加	不加	各 6μL（2 號樣到 2 號管，3 號樣到 3 號管…）

11.蓋上蓋子后上機，按下面參數(shù)進行 PCR（具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行優(yōu)化）。

四、熒光定量 PCR 反應(yīng)參數(shù)

五、數(shù)據(jù)處理
12.以陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度。

六、電泳檢測
13.如果有必要電泳確認，可取 10-20 uL PCR 產(chǎn)物直接在瓊脂糖凝膠上電泳產(chǎn) 物的大小為 400 bp。

雞源性成分單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒熒光定量PCR結(jié)果分析:
一般而言，熒光擴增曲線可以分成三個階段：熒光背景信號階段、熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化;在平臺期，擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級增加，PCR終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系，無法計算起始模板拷貝數(shù)。因此只有在熒光信號指數(shù)擴增階段，PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，故選擇在這個階段進行定量分析。為了定量方便，在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了幾個重要的概念：擴增曲線、熒光閾值、CT值。