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供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號(hào)	XY-0771	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。

驢源性成分單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

熒光定量 PCR 是檢測(cè)傳染性疾病的主流技術(shù)，本產(chǎn)品就是以染料法熒光定量 PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開(kāi)發(fā)的專門(mén)檢測(cè)驢源性成分單重?zé)晒?/span>的試劑盒。

驢源性成分單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 即開(kāi)即用，用戶只需要提供病毒 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化，靈敏性高。

3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 特異性高，引物是根據(jù)驢源性成分單重?zé)晒?/span>高度保守的 VP1 區(qū)設(shè)計(jì)。

5. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

產(chǎn)品名稱	方法	規(guī)格	價(jià)格
驢源性成分單重?zé)晒?/span>LAMP試劑盒	LAMP	50次	2490元
驢源性成分單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒	PCR	50次	1490元
驢源性成分單重?zé)晒?/span>染料法PCR試劑盒	染料法	50次	2490元
驢源性成分單重?zé)晒?/span>探針?lè)≒CR試劑盒	探針?lè)?/span>	50次	3490元

驢源性成分單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒包裝規(guī)格及成分：

編號(hào)	成分	規(guī)格
試劑一	2×PCR MagicMix	0.5 mL（棕色）
試劑二	熒光 PCR 模板稀釋液	1 mL（黃蓋）
試劑三	驢源性成分單重?zé)晒?/span>PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑四	驢源性成分單重?zé)晒?/span>PCR 陽(yáng)性對(duì)照 (1×10E8 拷貝/μL)	50 μL（紅蓋）
試劑五	DNA 病毒裂解液試用裝	15 次（9 mL）
試劑六	使用手冊(cè)	1 份

運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑：DNA 模板

驢源性成分單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒使用方法：

一.稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供無(wú)傳染性的 DNA 段作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

2.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同）。

3.在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供)，充分震蕩1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

4.換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

5.換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

6.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

二.樣品 DNA 的制備

7.如果有 N 個(gè)樣品，必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?10μL 上步制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的第 4 號(hào)（濃度為 1×10E4 拷貝/μL，10μL 相當(dāng)于 1 萬(wàn)拷貝）或第 5 號(hào)（濃度為 1×10E5 拷貝/μL，10μL 相當(dāng)于 10 萬(wàn)拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為 PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要 200μL 樣品，則 PC 和 NC 的體積也必須是 200μL。

8.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼容。?

過(guò)程	溫度	時(shí)間
預(yù)變性	94℃	5 min
PCR 反應(yīng) （35 個(gè)循環(huán)）	94℃	0.5 min
	50℃	0.5 min（采集 SYBR 通道的熒光信號(hào)）
	72℃	0.5 min
后延伸	72℃	10 min

三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20 μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）

9.如果只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照，6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。如果做 2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加 2 或 3 倍。

10.在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后后加）：

成分	樣品管 N+2 個(gè)	PCR 陰性對(duì)照管	標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品管（2-7 管）
2×qPCR MagicMix （棕色管）	10 μL	10 μL	各 10 μL
驢源性成分單重?zé)晒?/span>PCR 引物混合液（白蓋）	2 μL	2 μL	各 2 μL
自備 10×ROX (見(jiàn)注)	2 μL	2 μL	各 2 μL
待測(cè)樣品 DNA 模板	6 μL	不加	不加
第 7 步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液（2-7 號(hào)）	不加	不加	各 6μL（2 號(hào)樣到 2 號(hào)管，3 號(hào)樣到 3 號(hào)管…）

11.蓋上蓋子后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR（具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行優(yōu)化）。

四、熒光定量 PCR 反應(yīng)參數(shù)

五、數(shù)據(jù)處理
12.以陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度。

六、電泳檢測(cè)
13.如果有必要電泳確認(rèn)，可取 10-20 uL PCR 產(chǎn)物直接在瓊脂糖凝膠上電泳產(chǎn) 物的大小為 400 bp。

驢源性成分單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒熒光定量PCR結(jié)果分析:
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號(hào)階段、熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化;在平臺(tái)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)增加，PCR終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒(méi)有線性關(guān)系，無(wú)法計(jì)算起始模板拷貝數(shù)。因此只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段，PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，故選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量方便，在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了幾個(gè)重要的概念：擴(kuò)增曲線、熒光閾值、CT值。