有研究表明，骨髓基質(zhì)細(xì)胞（BMSC）在調(diào)控造血、組織修復(fù)及一些疑難疾病的治療中具有重要意義。然而BMSC并不具備典型形態(tài)特征，且骨髓涂片中數(shù)量甚少，傳統(tǒng)的wright-Giemsa法染色后于普通光鏡下不易識別。應(yīng)用單克隆抗體技術(shù)結(jié)合流式細(xì)胞儀、免疫細(xì)胞化學(xué)染色、熒光標(biāo)記技術(shù)等可將其鑒別，但亦各有其局限性。

　　為此，龔旭波等人^[1]建立了將固紫B鹽應(yīng)用于BMSC的特異性細(xì)胞化學(xué)染色方法。該方法簡便快速，整個操作過程僅需30 min，染色明顯，對陳舊標(biāo)本也易著色，染色液配置后可較長時間保存，染色結(jié)果保留數(shù)月也不褪色，表明固紫B鹽對BMSC染色具有較高的穩(wěn)定性、特異性。

 

 

◆實(shí)驗(yàn)步驟

 

1．標(biāo)本采集

　　吸取患者骨髓、胸腔積液或腹腔積液50 μL制成涂片。

 

2．溶液配制

　　固定液：95％乙醇溶液34.5 mL，40％甲醛溶液5.5 mL，蒸餾水1 mL混合而成；

　　1 g/L固紫B鹽PBS溶液：50 mg固紫B鹽粉末溶于50 mL PBS溶液，pH 7.2~7.6，4℃下保存；

　　蘇木精復(fù)染液：蘇木精2 g溶于250 mL無水乙醇中，硫酸鋁10 g溶于750 mL蒸餾水中，兩種溶液混合后加熱煮沸2 min，再加入0.5 g碘酸鈉和1 g檸檬酸，混勻。

 

3．固紫B鹽染色

　　上述新鮮干燥標(biāo)本于固定液固定30 s，小水流沖洗后晾干，置入1 g/L固紫B鹽PBS溶液（pH 7.2~7.6），37℃水浴箱內(nèi)置30 min，流水沖洗1 min，晾干后蘇木精復(fù)染2 min，流水沖洗，待干。鏡下觀察細(xì)胞的著色·情況及陽性BMSC形態(tài)特征。

 

 

◆染色效果

 

圖a~d: 骨髓涂片

a~d圖箭頭所示為骨髓基質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)染為紫紅色，胞核不著色，而其他細(xì)胞均無此染色特征（固紫B鹽染色x1000）

 

◆產(chǎn)品列表

 

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	包裝
060-01081	Fast Violet B Salt 固紫B鹽	Wako Special Grade	1.5 g

 

 

◆相關(guān)產(chǎn)品

 

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	包裝
052-07221	Ethanol(99.5) 乙醇（99.5）	for Molecular Biology	100 mL
166-23555	PBS(-) PBS緩沖液	for Cell Culture	500 mL
088-07461	Hematoxylin Monohydrate 蘇木精一水合物	for Cell Staining	5 g
018-09745	Aluminium Sulfate 硫酸鋁	Practical Grade	500 g
190-02252	Sodium Iodate 碘酸鉀	Wako Special Grade	25 g
036-05522	Citric Acid 檸檬酸	Wako Special Grade	25 g

 

 

◆參考文獻(xiàn)

 

[1]龔旭波, 吳先國, 盧興國, 等. 骨髓基質(zhì)細(xì)胞固紫B鹽染色法的建立及其臨床意義[J]. 中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2008,31(8):890-893.