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細(xì)胞培養(yǎng)的這些細(xì)節(jié)不能忽視!
細(xì)胞培養(yǎng)是生物研究的核心,是在其自然環(huán)境以外的受控條件下培養(yǎng)和維持細(xì)胞的過(guò)程,對(duì)研究基礎(chǔ)細(xì)胞生物學(xué)和生物化學(xué)、研究疾病和開(kāi)發(fā)新療法等多個(gè)研究領(lǐng)域都至關(guān)重要。
梅特勒托利多全新推出《細(xì)胞培養(yǎng)指南》提供從細(xì)胞選擇到細(xì)胞處理和轉(zhuǎn)導(dǎo),整個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程的分步指南,旨在幫助您充分利用細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)踐。
今天,就帶大家先來(lái)了解一些細(xì)胞培養(yǎng)中的基礎(chǔ)內(nèi)容,更多內(nèi)容請(qǐng)掃描上方二維碼下載指南。
細(xì)胞的類型與特點(diǎn)
?為了實(shí)現(xiàn)成功的細(xì)胞培養(yǎng),須分析各類可用細(xì)胞的優(yōu)缺點(diǎn),了解哪類細(xì)胞能提供最有益的產(chǎn)出。
貼壁、懸浮培養(yǎng)
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貼壁細(xì)胞
貼壁細(xì)胞在培養(yǎng)皿上單層生長(zhǎng)。在傳代過(guò)程中,必須使用分離劑(如胰蛋白酶或細(xì)胞消化液)將這些細(xì)胞分離;而通常情況下,它們會(huì)在接種后2-4小時(shí)內(nèi)重新粘附到孔板上。
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懸浮細(xì)胞(即淋巴母細(xì)胞樣細(xì)胞)
不會(huì)粘附在培養(yǎng)皿表面,而是懸浮在培養(yǎng)基中。它們通常成團(tuán)生長(zhǎng),尤其是在密度較高處。
原代細(xì)胞、永生化細(xì)胞系和iPSC
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原代細(xì)胞
從其原生組織中直接分離并體外培養(yǎng)。常用的原代細(xì)胞包括通過(guò)皮膚活檢直接從患者體內(nèi)分離出的成纖維細(xì)胞、從胚胎期或出生后的小鼠或大鼠的大腦特定區(qū)域離解出的神經(jīng)元,以及從患者血液樣本中分離出的紅細(xì)胞。
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永生化細(xì)胞系
與原代細(xì)胞一樣來(lái)源于組織樣本,但已經(jīng)歷過(guò)永生化,細(xì)胞系可以多次傳代而不喪失活性,并繞開(kāi)與原代細(xì)胞相關(guān)的倫理規(guī)范。細(xì)胞系通常易于培養(yǎng),還可在液氮中冷凍以長(zhǎng)期儲(chǔ)存,并在日后復(fù)蘇(解凍)以繼續(xù)使用。
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iPSC
誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(簡(jiǎn)稱iPSC或iPS細(xì)胞)衍生自血液或皮膚,已被重新編程為多能性干細(xì)胞(或胚胎樣干細(xì)胞),這意味著它們可以分化成任何類型的人體細(xì)胞。在不同的發(fā)育階段添加特異性生長(zhǎng)因子可以使細(xì)胞分化成所需的類型。
細(xì)胞培養(yǎng)的成功因素
細(xì)胞培養(yǎng)中的許多挑戰(zhàn)都源于不良的液體處理技術(shù),而通過(guò)優(yōu)化移液器選擇,減少所需的處理步驟并規(guī)范移液操作,可以改善或避免這些挑戰(zhàn)。
以下幾個(gè)特點(diǎn)需特別注意:
01 無(wú)菌性
細(xì)胞培養(yǎng)中使用的液體處理設(shè)備和耗材可能會(huì)滋生許多微生物。遵循以下建議可降低液體處理設(shè)備與細(xì)胞之間交叉污染的概率:
• 細(xì)胞培養(yǎng)中使用的設(shè)備(包括單通道、多通道移液器和連續(xù)分配器)應(yīng)專用于其對(duì)應(yīng)區(qū)域
• 在細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)施中使用任何移液器之前,先用70%的酒精對(duì)其移液端進(jìn)行消毒,并盡可能使用無(wú)菌濾芯吸頭
• 計(jì)劃定期清潔儀器的內(nèi)部組件
• 定期對(duì)儀器進(jìn)行維修保養(yǎng),以驗(yàn)證其內(nèi)部組件的完整性(即確保無(wú)腐蝕、破損組 件等)
• 定期更換電動(dòng)助吸器的濾芯
02 可重現(xiàn)性
培養(yǎng)參數(shù)、細(xì)胞處理、細(xì)胞接種和細(xì)胞活性也會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的可重現(xiàn)性。對(duì)于儀器,用戶必須驗(yàn)證以下幾點(diǎn):
• 制造商技術(shù)規(guī)格:系統(tǒng)誤差和隨機(jī)誤差
• 移液器的完整性:確保無(wú)部件缺失或破損、內(nèi)部腐蝕等
• 定期校準(zhǔn)服務(wù):服務(wù)時(shí)間間隔越短,早發(fā)現(xiàn)破損情況的幾率就越高,移液器的使用也就越符合規(guī)范
03 速度和效率
在細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中,務(wù)必迅速操作以保持細(xì)胞活性并避免細(xì)胞過(guò)長(zhǎng)時(shí)間暴露在次優(yōu)條件下。這對(duì)于精細(xì)細(xì)胞系或已經(jīng)受到壓力的細(xì)胞尤其重要!(例如從腦組織中分離出的原代神經(jīng)元)
細(xì)胞培養(yǎng)液體處理工具
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