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感覺態(tài)細(xì)胞的儲存和制備注意事項

閱讀:5589      發(fā)布時間:2023-1-17
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   感覺態(tài)細(xì)胞的儲存:
  每次轉(zhuǎn)化時使用新鮮的細(xì)胞是明智的,因?yàn)殚L時間儲存,轉(zhuǎn)化效率會降低,但這并不總是可行的。
 
  感受態(tài)細(xì)胞可以存儲在-80°C長達(dá)一年,沒有轉(zhuǎn)化潛能的損失。然而,瞬間凍結(jié)在液氮或-80°C冰箱是不建議的。需要在冷凍保護(hù)劑中,像哺乳動物細(xì)胞一樣緩慢地冷凍。
 
  使用硬紙板或聚苯乙烯泡沫塑料盒等儲存。
 
  用紙片等將盒子里的細(xì)胞管隔開,分成多個小格子。
 
  復(fù)蘇過程中,在37°C解凍細(xì)胞,轉(zhuǎn)化前用豐富培養(yǎng)基清洗防凍劑。
 
  感覺態(tài)細(xì)胞的制備注意事項:
  1、配制溶液的水受有機(jī)污染,會降低感受態(tài)的轉(zhuǎn)化率;
 
  2、液氮速凍可以提高轉(zhuǎn)化效率約5倍;
 
  3、甘油會使細(xì)菌沉淀附著力降低;
 
  4、感受態(tài)細(xì)胞是很脆弱的,實(shí)驗(yàn)操作過程中,動作要輕;
 
  5、制備感受態(tài),所用的試劑及器具的潔凈程度要求高;操作要求嚴(yán)格;轉(zhuǎn)化效率高;
 
  6、為達(dá)到高轉(zhuǎn)化效率,活細(xì)胞數(shù)需少于108個細(xì)胞/ml;
 
  7、不同菌株之間,OD600的數(shù)值與每毫升中活細(xì)胞數(shù)間的關(guān)系很大;
 
  8、在大腸桿菌生長曲線上,在生長初期和末期兩個時期獲得較高轉(zhuǎn)化率;
 
  9、有實(shí)驗(yàn)曾表明,可以在4℃在氯化鈣溶液中保存24-48h,在起初保存的12-24h內(nèi),轉(zhuǎn)化效率會有所提高,然后降低到初始水平;
 
  10、對于克隆用途來說,每份細(xì)胞體積有50μl足矣;
 
  11、玻璃管會降低轉(zhuǎn)化率約10倍。

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