上海申知心生物科技有限公司

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細(xì)胞平板克隆形成實(shí)驗(yàn)
細(xì)胞平板克隆形成實(shí)驗(yàn)
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更新時(shí)間：2023-08-29 10:37:03瀏覽次數(shù)：2631

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【簡(jiǎn)單介紹】
產(chǎn)地類別 國(guó)產(chǎn) 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè)
細(xì)胞平板克隆形成實(shí)驗(yàn)是當(dāng)單個(gè)細(xì)胞在體外增殖6代以上,其后代所組成的細(xì)胞群體,稱為集落或者克隆。每個(gè)克隆含有50個(gè)以上的細(xì)胞，大小在0.3-1.0mm之間。集落形成率表示細(xì)胞的獨(dú)立生存能力。細(xì)胞接種存活率只表示接種細(xì)胞后貼壁的細(xì)胞數(shù),但貼壁的細(xì)胞不一定每個(gè)都能增殖和形成克隆。
【詳細(xì)說(shuō)明】

平板克隆形實(shí)驗(yàn)步驟

1、細(xì)胞懸液制備:取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的單層培養(yǎng)細(xì)胞，用0. 25%胰蛋白酶消化并吹打成單個(gè)細(xì)胞，離后用*培養(yǎng)基重懸,制成細(xì)胞懸液。

2、細(xì)胞種板:將細(xì)胞懸液作梯度倍數(shù)稀釋，以每皿50、100、 200、 500、1000、 2000個(gè)細(xì)胞的梯度密度分別接種含1 ml 37 C預(yù)熱培養(yǎng)液的皿中，并輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，使細(xì)胞分散均勻。置37 C 5% Co2的環(huán)境下，靜置培養(yǎng)。

3、細(xì)胞觀察:顯微鏡下觀察到單個(gè)細(xì)胞長(zhǎng)到20個(gè)以上細(xì)胞克隆，培養(yǎng)皿中出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的克隆時(shí)，終止培養(yǎng)。棄去.上清液，用PBS小心浸洗2次。加純甲醇1ml,固定15分鐘。然后去固定液,加適量Giemsa應(yīng)用染色液染10分鐘，然后用流水緩慢洗去染色液，空氣干燥，手記拍照采集圖像。

4、克隆計(jì)數(shù):用肉眼直接計(jì)數(shù)克隆數(shù)，后計(jì)算克隆形成率。

結(jié)果分析

平板克隆克隆形成率=克隆數(shù)接種細(xì)胞數(shù)x100%



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