遺傳毒性（Genotoxicity）是指遺傳物質(zhì)中任何有害變化引起的毒性，而不參考誘發(fā)該變化的機(jī)制，又稱為基因毒性。遺傳毒性雜質(zhì)（Genotoxic Impurities, GTIs）是指能引起遺傳毒性的雜質(zhì)，包括致突變型雜質(zhì)和其他類型的無致突變性雜質(zhì)。致突變型雜質(zhì)（Mutagenic Impurities）指在較低水平時(shí)也有可能直接引起DNA損傷，導(dǎo)致NDA突變，從而可能引發(fā)癌癥的遺傳毒性雜質(zhì)[1]。目前遺傳毒性列表中有1574種致癌物質(zhì)，亞硝胺類、磺酸酯類和苯并芘類等屬于高遺傳毒性物質(zhì)。近年來，出現(xiàn)多起已上市的藥品中發(fā)現(xiàn)遺傳毒性，繼而被召回的案例。

　　例如某制藥企業(yè)在歐洲推出的抗艾滋藥物Viracept(nelfinavir mesylate)，EMA在2007年7月暫停了它在歐洲的所有市場活動，因?yàn)樵谄洚a(chǎn)品中發(fā)現(xiàn)甲基磺酸乙酯超標(biāo)。經(jīng)自查，發(fā)現(xiàn)存儲罐中乙醇?xì)埩?，放?個(gè)月導(dǎo)致甲磺酸乙酯達(dá)到2300ppm，去掉存儲罐，增加對甲磺酸乙酯的控制要求低于0.5ppm，EMA對新工藝重新評估，對工廠進(jìn)行現(xiàn)場檢查，2007年10月重新獲得上市許可。2018年7月，歐盟藥品管理局報(bào)道在其對某企業(yè)含有ARB藥物纈沙坦原料藥的藥物抽查匯總發(fā)現(xiàn)了雜質(zhì)NDMA，其平均含量達(dá)66.5ppm，超過歐盟標(biāo) 準(zhǔn)0.3ppm。隨后已有包括美國，加拿大，挪威，德國等22個(gè)國家召回共2300批該企業(yè)的含有沙坦類原料藥的降壓藥。相關(guān)藥企沙坦原料藥中的NDMA經(jīng)推斷疑似來源于藥物合成過程中使用的溶劑N,N-二甲基甲酰胺（DMF）與亞硝酸鈉在酸性條件下反應(yīng)產(chǎn)生的微量副產(chǎn)物，即NDMA。隨后FDA發(fā)布了GCMS測定NDMA和NDEA的方法。2019年3月，又一種亞硝胺類雜質(zhì)（NMBA）在ARB藥物氯沙坦中被發(fā)現(xiàn)，但是該物質(zhì)不能直接被GCMS測定。 9月FDA發(fā)表聲明，在雷尼替丁中發(fā)現(xiàn)NDMA，但是不適用于GCMS方法測定。原因是雷尼替丁結(jié)構(gòu)中，硝基和二甲胺在高溫下從母核解離，結(jié)合成NDMA，對GCMS法測定產(chǎn)生干擾。

　島津中國創(chuàng)新中心，不僅致力于科研領(lǐng)域，同時(shí)時(shí)刻關(guān)注各行業(yè)的發(fā)展和社會的需求，秉承著以科學(xué)技術(shù)向社會做貢獻(xiàn)的宗旨不斷前行。本項(xiàng)目針對部分亞硝胺類和磺酸酯類遺傳毒性雜質(zhì)在藥品原料藥中的測定提供檢測方法，為行業(yè)客戶提供參考。針對客戶比較關(guān)心的幾種遺傳毒性雜質(zhì)分別建立了方法，并完成完整的方法學(xué)驗(yàn)證。

　　2019年6月，創(chuàng)新中心*推出遺傳毒性雜質(zhì)NMBA（N-亞硝基-N-甲基-4-氨基丁酸）LC-MS/MS解決方案。與此同時(shí)，對NDMA和NDEA的研究也已在《分析試驗(yàn)室》2020年39卷2期上發(fā)表雜質(zhì)上發(fā)表；關(guān)于NMBA的研究已在《中國藥學(xué)雜志》2020年55卷3期上發(fā)表。如下將上述研究報(bào)告分別簡述，供行業(yè)客戶參考。

1. HS-GC-MS檢測原料藥厄貝沙坦中N-亞硝基二甲胺和N-亞硝基二乙胺

 　　本文利用島津公司GCMS-QP2020 NX氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀結(jié)合HS-20頂空進(jìn)樣器，建立了原料藥厄貝沙坦中N-亞硝基二甲胺和N-亞硝基二乙胺的同時(shí)測定方法。在10~500ng/mL濃度范圍內(nèi)各組分線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均達(dá)到0.999以上，100ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品溶液連續(xù)進(jìn)樣6針，各組分峰面積RSD均小于2.40%。陰性空白樣品在40，80，160ng/mL加標(biāo)濃度時(shí)，回收率為100.6%-104.6%，陽性空白樣品回收率為101.8%-108.7%。該方法簡單方便，頂空進(jìn)樣不污染氣化室，能夠有效的檢測原料藥厄貝沙坦中N-亞硝基二甲胺和N-亞硝基二乙胺的含量。

2. 島津中國推出氯沙坦鉀中N-亞硝基-N-甲基-4-氨基丁酸（NMBA）解決方案

 　　本文利用島津公司LCMS-8050高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀，建立了原料藥中氯沙坦鉀中NMBA的測定方法。該方法中NMBA在0.1 ~ 50.0 ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，日內(nèi)和日間的精密度保留時(shí)間和峰面積的重復(fù)性良好(RSD均小于1.10%，n = 6和n = 18)，在低中高3個(gè)濃度的平均回收率在94.40 ~ 98.04%之間。該方法簡單方便，能夠快速有效的檢測氯沙坦鉀原料藥中NMBA的含量。

3. GC-MS內(nèi)標(biāo)法測定甲磺酸中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸異丙酯 

 　　本文利用島津公司GCMS-QP2020 NX氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，參照《歐洲藥典》9.0和ICH指導(dǎo)原則，建立了以甲磺酸丁酯（BMS）為內(nèi)標(biāo)測定甲磺酸中甲磺酸甲酯（MMS）、甲磺酸乙酯（MES）和甲磺酸異丙酯（IMS）的方法并完成方法學(xué)驗(yàn)證。在1~10000ng/mL濃度范圍內(nèi)甲磺酸甲酯線性關(guān)系良好，在1~100ng/mL內(nèi)甲磺酸乙酯和甲磺酸異丙酯線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均達(dá)到0.999以上，樣品平行測定6次，計(jì)算各組分含量RSD均小于3.33%。樣品在650，850，1000ng/mL加標(biāo)濃度時(shí)，MMS回收率為91.85%-103.09%，在10ng/mL加標(biāo)濃度時(shí)，EMS、IMS回收率為92.21%-105.93%。該方法靈敏度和準(zhǔn)確度高，能夠有效的檢測甲磺酸中MMS、EMS和IMS的含量。

4. GC-MS內(nèi)標(biāo)曲線法測定甲磺酸中甲磺酰氯

 　　本文利用島津公司GCMS-QP2020 NX氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，參照《歐洲藥典》9.0和ICH指導(dǎo)原則，建立了以甲磺酸丁酯（BMS）為內(nèi)標(biāo)測定甲磺酸中甲磺酰氯的方法并完成方法學(xué)驗(yàn)證。在1~5000ng/mL濃度范圍內(nèi)甲磺酰氯線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.999，樣品平行測定6次，計(jì)算組分含量RSD為1.19%。樣品在320，400，480ng/mL加標(biāo)濃度時(shí)，甲磺酰氯回收率為100.09%-109.84%。該方法靈敏度和準(zhǔn)確度高，能夠有效的檢測甲磺酸中甲磺酰氯的含量。

5. HS-GC-MS法測定甲磺酸倍他司汀中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸異丙酯

 　　本文利用島津公司GCMS-QP2020 NX氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀結(jié)合HS-20頂空進(jìn)樣器，參照《歐洲藥典》9.0和ICH指導(dǎo)原則，建立了以甲磺酸丁酯（BMS）為內(nèi)標(biāo)，通過碘化鈉衍生化，測定甲磺酸倍他司汀原料藥中甲磺酸甲酯（MMS）、甲磺酸乙酯（MES）和甲磺酸異丙酯（IMS）的方法并完成方法學(xué)驗(yàn)證。在1~250ng/mL濃度范圍內(nèi)MMS和EMS線性關(guān)系良好，在1.5~250ng/mL內(nèi)IMS線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均達(dá)到0.999以上，樣品加標(biāo)平行測定6次，計(jì)算各組分含量RSD均小于2.40%。樣品在80，100，120ng/mL加標(biāo)濃度時(shí)，MMS、 EMS和IMS回收率在93.86%~112.21%之間。該方法操作簡單，靈敏度和準(zhǔn)確度高，能夠有效的檢測甲磺酸倍他司汀中MMS、EMS和IMS的含量。

6. HS-GC-MS法測定甲苯磺酸舒他西林中甲苯磺酸甲酯、乙酯、異丙酯

 　　本文利用島津公司GCMS-QP2020 NX氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀結(jié)合HS-20頂空進(jìn)樣器，參照《歐洲藥典》9.0和ICH指導(dǎo)原則，建立了以甲磺酸丁酯（BMS）為內(nèi)標(biāo)，通過碘化鈉衍生化，測定甲苯磺酸舒他西林原料藥中甲苯磺酸甲酯（MTS）、甲苯磺酸乙酯（ETS）和甲苯磺酸異丙酯（ITS）的方法并完成方法學(xué)驗(yàn)證。在1.5~250ng/mL濃度范圍內(nèi)MTS和ETS衍生化后的碘甲烷（MeI）和碘乙烷（EtI）線性關(guān)系良好，在3~250ng/mL內(nèi)ITS衍生后的（iPrI）線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均達(dá)到0.998以上，樣品加標(biāo)平行測定6次，計(jì)算各組分含量RSD均小于4.50%。樣品在20，40，60ng/mL加標(biāo)濃度時(shí)，MTS、 ETS和ITS回收率在92.50 %~108.13%之間。該方法操作簡單，靈敏度和準(zhǔn)確度高，能夠有效的檢測甲苯磺酸舒他西林中MTS、ETS和ITS的含量。

7. HS-GC-MS法測定苯磺酸氨氯地平中苯磺酸甲酯、乙酯、異丙酯

 　　本文利用島津公司GCMS-QP2020 NX氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀結(jié)合HS-20頂空進(jìn)樣器，參照《歐洲藥典》9.0和ICH指導(dǎo)原則，建立了以甲磺酸丁酯（BMS）為內(nèi)標(biāo)，通過碘化鈉衍生化，測定苯磺酸氨氯地平原料藥中苯磺酸甲酯（MTS）、苯磺酸乙酯（ETS）和苯磺酸異丙酯（ITS）的方法并完成方法學(xué)驗(yàn)證。在1.5~250ng/mL濃度范圍內(nèi)MBS和EBS衍生化后的碘甲烷（MeI）和碘乙烷（EtI）線性關(guān)系良好，在3~250ng/mL內(nèi)IBS衍生后的（iPrI）線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均達(dá)到0.999以上，樣品加標(biāo)平行測定6次，計(jì)算各組分含量RSD均小于5.46%。樣品在5，10，15ng/mL加標(biāo)濃度時(shí)，MBS、 EBS和IBS回收率在85.4 %~104.70%之間。該方法操作簡單，靈敏度和準(zhǔn)確度高，能夠有效的檢測苯磺酸氨氯地平MBS、EBS和IBS的含量。

[1] 《中國藥典》2020年版四部通則增修訂內(nèi)容：遺傳毒性雜質(zhì)控制指導(dǎo)原則審核稿（新增）