目前，在抗生素新藥申報(bào)日益嚴(yán)格的大背景下，聚合物雜質(zhì)的研究常常是藥品審評(píng)中心（Center for Drug Evaluation, CDE）發(fā)補(bǔ)及退審的理由。抗生素中聚合物雜質(zhì)是引起臨床不良反應(yīng)的主要過(guò)敏原，嚴(yán)格控制其含量具有重要的意義。傳統(tǒng)的聚合物雜質(zhì)檢測(cè)通常采用排阻色譜法，該方法檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、分離度和專屬性不足，對(duì)聚合物雜質(zhì)進(jìn)行籠統(tǒng)的總量控制，定量不準(zhǔn)確，且無(wú)法鑒定聚合物雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)。

為了解決這些難題，島津公司與北京新領(lǐng)先醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司合作搭建了SEC-RPLC-QTOF二維液相色譜-高分辨質(zhì)譜檢測(cè)平臺(tái)。基于該平臺(tái)二維雜質(zhì)動(dòng)態(tài)上樣、在線脫鹽等技術(shù)，以及島津高分辨質(zhì)譜儀的高質(zhì)量準(zhǔn)確度和高質(zhì)量穩(wěn)定性等性能特點(diǎn)，目前雙方的研發(fā)人員共同參與完成了十四種β-內(nèi)酰胺類抗生素的聚合物雜質(zhì)的全面解析，并建立質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)。

二維液相色譜-高分辨質(zhì)譜檢測(cè)平臺(tái)

SEC-RPLC-QTOF

參考2020年版《中國(guó)藥典》頭孢米諾和頭孢地嗪有關(guān)物質(zhì)Ⅱ檢測(cè)方法，一維采用島津Shimpack Bio Diol-60高效凝膠色譜柱進(jìn)行分離，將聚合物雜質(zhì)指針性地導(dǎo)入樣品環(huán)；然后采用中心切割在線除鹽進(jìn)行二維反相色譜分離目標(biāo)雜質(zhì)，并通過(guò)LCMS-9030四極桿飛行時(shí)間高分辨質(zhì)譜采集，獲得準(zhǔn)確的一級(jí)和二級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù)來(lái)達(dá)到鑒定雜質(zhì)的目的。

SEC-RPLC-QTOF

二維液相色譜-高分辨質(zhì)譜檢測(cè)平臺(tái)流路圖

抗生素雜質(zhì)數(shù)字化標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)據(jù)庫(kù)

創(chuàng)新中心開(kāi)發(fā)的《抗生素雜質(zhì)數(shù)字化標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)據(jù)庫(kù)》已收錄《歐洲藥典》β-內(nèi)酰胺類抗生素相關(guān)雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品基于島津液相色譜-高分辨質(zhì)譜儀LCMS-9030采集的ESI正/負(fù)雙模式，7個(gè)不同碰撞能量下的二級(jí)質(zhì)譜圖，同時(shí)數(shù)據(jù)庫(kù)已登錄化合物信息、可能的結(jié)構(gòu)式、分析方法的色譜條件和《中國(guó)藥典》流動(dòng)相條件對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間等。此外，為方便使用者從高分辨質(zhì)譜方法向低分辨質(zhì)譜方法的轉(zhuǎn)化，本數(shù)據(jù)庫(kù)還登錄了14種抗生素品種相關(guān)雜質(zhì)的MRM方法文件，適用于液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜產(chǎn)品的檢測(cè)。

目前數(shù)據(jù)庫(kù)包含頭孢甲肟、拉氧頭孢、氟氧頭孢鈉、頭孢呋辛、頭孢曲松、頭孢他碇、頭孢吡肟、頭孢唑啉鈉、阿莫西林、頭孢呋辛酯、頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉、頭孢克肟、頭孢泊肟酯和頭孢地尼等14種β-內(nèi)酰胺類抗生素品種，153種雜質(zhì)和主成分對(duì)照品，以及50余種高分子聚合物雜質(zhì)的共計(jì)1483張二級(jí)質(zhì)譜圖。

應(yīng)用案例：阿莫西林聚合物雜質(zhì)的鑒定

采用SEC-RPLC-QTOF二維液相色譜-高分辨質(zhì)譜檢測(cè)平臺(tái)共檢出阿莫西林熱降解溶液中14種雜質(zhì)成分，成功分離出阿莫西林二聚體，三聚體，四聚體及其異構(gòu)體。下圖為阿莫西林二聚體在數(shù)據(jù)庫(kù)中的檢索結(jié)果。

阿莫西林二聚體鑒定結(jié)果

詳細(xì)信息請(qǐng)參考：《阿莫西林膠囊熱降解聚合物雜質(zhì)的2D-HPLC分析及質(zhì)譜裂解機(jī)理探討》《藥物分析雜志》中圖分類號(hào)：R917 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A  文章編號(hào)：0254-1793(2021)07

doi: 10.16155/j.0254-1793.2021.07。

總結(jié)

創(chuàng)新中心搭載的專屬性中心切割二維反相色質(zhì)譜聯(lián)用分析平臺(tái)SEC-RPLC-QTOF，采用中心切割技術(shù)，在線除鹽分離出目標(biāo)雜質(zhì)，利用LCMS-QTOF配合自主開(kāi)發(fā)的質(zhì)譜庫(kù)進(jìn)行鑒定。該分析平臺(tái)不僅為企業(yè)客戶大大降低了企業(yè)研發(fā)成本，同時(shí)也為企業(yè)的工藝改進(jìn)、劑型研發(fā)、品質(zhì)提升等方面提供技術(shù)參考。