N-聚糖唾液酸結(jié)合異構(gòu)體鑒定——SialoCapper™-ID試劑盒+MALDI-8020

時(shí)間：2021-11-30 閱讀：596

唾液酸（SA）是酸性單糖的家族名稱，包括 N-乙酰神經(jīng)氨酸 (NeuAc) 和 N-羥乙酰神經(jīng)氨酸 (NeuGc)，主要存在于聚糖的非還原末端。是一種天然存在的碳水化合物，最初由頜下腺粘蛋白分離出，因此而得名。唾液酸通常以低聚糖，糖脂，糖蛋白的形式存在。唾液酸可以以 α2,3- 或 α2,6- 鍵類型存在。這樣的連接異構(gòu)體在生物學(xué)上很重要，因?yàn)椴煌B鎖類型可能與各種疾病有關(guān)，例如病毒感染和癌癥。

近年來(lái)，質(zhì)譜技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于分析聚糖。然而，鑒定含有多個(gè)唾液酸殘基的復(fù)雜聚糖的唾液酸鍵類型仍然具有挑戰(zhàn)性。本研究工作通過(guò)使用“SialoCapper-ID 試劑盒”進(jìn)行*的衍生化，然后進(jìn)行 MALDI-8020 MS分析，從而鑒定2-氨基吡啶（PA）標(biāo)記的聚糖上的酸譜系類型。

SialoCapper-ID 試劑盒是一種用于聚糖預(yù)處理的新型試劑盒，可簡(jiǎn)化唾液酸鍵特異性烷基酰胺化 (SALSA 方法）步驟。SALSA通過(guò)中和殘留物來(lái)防止在聚糖預(yù)處理和 MS 分析過(guò)程中唾液酸殘留物的損失。此外，它允許通過(guò)以特定鍵的方式衍生殘基來(lái)基于 MS 區(qū)分唾液酸鍵異構(gòu)體。

SALSA法的衍生方案

本實(shí)驗(yàn)中，N-連接聚糖通過(guò)肼解作用從51只大鼠102只耳蝸血管紋衍生的糖蛋白中釋放出來(lái)的。N-聚糖的還原端用PA標(biāo)記。然后根據(jù)唾液酸的數(shù)量通過(guò) DEAE 陰離子交換 HPLC 對(duì) PA 標(biāo)記的聚糖進(jìn)行分離，并在 ODS 柱上使用反相 (RP) HPLC 進(jìn)一步分離。使用酰胺柱和 LC-MS 通過(guò)正相 (NP) HPLC 分析分級(jí)的 N-聚糖，并根據(jù)二維 (2-D) HPLC 分析 (RP/NP) 的結(jié)果確定 N-聚糖的結(jié)構(gòu) 和 LC/MS 分析。最后，使用 SialoCapper-ID Kit 進(jìn)行唾液酸鍵特異性衍生化，用于未確定唾液酸鍵類型的分離。

在用碳芯片對(duì) 14 份 PA 標(biāo)記的聚糖進(jìn)行脫鹽后，使用 SialoCapper-ID 試劑盒在試管中以液相反應(yīng)的形式進(jìn)行唾液酸鍵特異性衍生化。

除了通過(guò) 2-D HPLC 和 LC/MS 進(jìn)行結(jié)構(gòu)測(cè)定外，研究者另辟蹊徑，使用MALDI-8020+ SialoCapper-ID 試劑盒根據(jù)唾液酸鍵特異性衍生化產(chǎn)生的質(zhì)量變化來(lái)區(qū)分唾液酸鍵類型。相對(duì)于LC/MS，MALDI-MS有利于輕松快速鑒定唾液酸鍵類型，特別是在分析多個(gè)樣品時(shí)。