0512高效液相色譜法“方法轉換”

2015版與2020版藥典中“色譜參數(shù)調(diào)整”比較

2015年版《中國藥典》0512通則規(guī)定：品種正文項下規(guī)定的色譜條件（參數(shù)），除填充劑種類、流動相組分、檢測器類型不得改變外，其余如色譜柱內(nèi)徑與長度、填充劑粒徑、流動相流速、流動相組分比例、柱溫、進樣量、檢測器靈敏度等可適當調(diào)整。

2020版藥典全面增訂“色譜參數(shù)允許調(diào)整的范圍”，品種項下條件不再是固定的，本次增訂內(nèi)容提供了“使用不同粒徑、內(nèi)徑色譜柱的液相色譜方法轉換的操作準則”，用戶可依據(jù)通則進行HPLC法向UHPLC法轉換，可有效較少單針分析時間，提高分析通量，減少儀器用電耗能、人工成本、廢液處理成本、試劑成本。

注：表格來自《中國藥典》2020年版四部 0512通則

可通過相關軟件計算表中流速、進樣體積和梯度洗脫程序的調(diào)整范圍，并根據(jù)色譜峰分離情況進行微調(diào)。

島津方法轉換應對方案

面對標準變化和用戶需求，島津提供“方法轉換工具”、超高效液相色譜儀、色譜柱整體解決方案助力用戶應對方法轉換。

島津方法轉換工具

島津方法轉換工具特點

•全中文界面，操作簡便，既支持獨立運行，亦可嵌入LabSolutions工作站運行，可兼容不同的島津機型，產(chǎn)品系列、型號和產(chǎn)品圖可視化。

•內(nèi)置ChP（中國藥典2020年版）計算公式，自動計算流速、進樣體積、梯度洗脫程序；內(nèi)置流速自定義輸入框，如調(diào)整，軟件自動同步計算調(diào)整后的梯度程序。

•內(nèi)置梯度模式、混合器體積、最大進樣體積、死體積及檢測池體積選擇項目，方便用戶進行系統(tǒng)匹配。

•可實現(xiàn)梯度開始時間或梯度程序的調(diào)節(jié)，梯度表折線圖及轉換前后梯度疊加圖顯示可視化；速度提升倍數(shù)、節(jié)約溶劑量顯示可視化，助力成本核算。

•L/dP值自動計算，自動計算參考范圍（0512通則色譜參數(shù)允許調(diào)整的范圍），自動檢查是否超范圍與超出參考范圍提示（紅色標記，評價區(qū)文字提示）。

•儀器系統(tǒng)壓力預測，自動提示是否超出型號耐壓限值并給出提示，指導選擇合適型號儀器與色譜柱可為儀器選型和色譜柱規(guī)格選擇提供參考。

使用方法

1點擊初始方法和目標方法下對應系列按鍵，進入設置界面，選擇轉換前后的儀器型號，梯度模式和混合器體積。

2先后輸入當前HPLC使用色譜柱和計劃轉換后UHPLC使用色譜柱規(guī)格，需注意L/dp 值應在原有數(shù)值的-25%～+50%范圍內(nèi)。

3左側輸入轉換前HPLC色譜方法條件，軟件自動計算轉換后條件數(shù)值。

4左側梯度表輸入當前HPLC梯度程序，右側即會自動轉換為UHPLC梯度。

5評價區(qū)智能提示超限項目。

使用注意事項

為獲得良好方法轉換效果及高匹配色譜圖表現(xiàn)，建議使用同一品牌同一系列（如Shim-pack系列）或者性能相近的色譜柱。

對于梯度分析， 系統(tǒng)延遲體積對于分析影響較大，需要注意HPLC和UHPLC使用儀器混合器體積差異，并在軟件設置模塊輸入相應參數(shù)。

不同LC平臺選擇和對應色譜柱選擇

島津多系列HPLC可以滿足用戶不同分析需求，選擇和 LC 液相系統(tǒng)更為匹配的色譜柱可以獲得更高的分離效率，如下表格總結了針對不同的液相系統(tǒng)配置如何選擇色譜柱。

應用案例

赤芍配方顆粒HPLC轉化為UHPLC法

轉換成UHPLC法后，分析效率提升至原來的3倍以上。轉換成UHPLC法后，特征峰順序、數(shù)量、RRT、相對峰面積均符合標準規(guī)定。

銀杏葉提取物UHPLC法轉化為HPLC法

轉換前后，各色譜峰出峰順序和個數(shù)保持一致，指紋圖譜相似度均達到0.90以上。