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制備液相系統(tǒng)常用于混合樣品中目標(biāo)化合物的分離純化，建立合適高效的分析條件是獲取高純度目標(biāo)化合物的重要環(huán)節(jié)之一。分析條件的優(yōu)化通常在分析規(guī)模上進(jìn)行，這一過程包含流動(dòng)相篩選、梯度優(yōu)化等，各環(huán)節(jié)都需要消耗大量時(shí)間。此外，樣品回收后純度復(fù)測(cè)通常需要手動(dòng)轉(zhuǎn)移至進(jìn)樣器完成，增加了人力成本。因此，本文以氫化可的松的純化過程為例，展示島津分析制備雙流路系統(tǒng)搭配LabSolutions MD方法開發(fā)軟件，將條件優(yōu)化、放大制備、純度復(fù)測(cè)等過程集中于單一系統(tǒng)中，以完成整個(gè)工作流程。

圖1 制備純化的工作流程

島津分析制備雙流路系統(tǒng)

ü                      單一系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)從分析到制備的方法放大及純度和回收率的確認(rèn)

ü                      利用方法開發(fā)軟件（LabSolutions MD）自動(dòng)創(chuàng)建分析方案并實(shí)現(xiàn)分離條件優(yōu)化

ü                      LH-40液體處理器可直接將餾分再進(jìn)樣于分析流路，完成純度檢測(cè)

分析規(guī)模下分離條件的優(yōu)化

條件優(yōu)化前，氫化可的松與主要雜質(zhì)水楊酸之間非常接近（圖2）。此時(shí)如果增加上樣量可能影響兩種化合物之間分離進(jìn)一步惡化，從而導(dǎo)致回收率降低。因此，優(yōu)化分離條件至關(guān)重要。常規(guī)的優(yōu)化方式，往往需要人為設(shè)置多個(gè)方法來逐個(gè)驗(yàn)證，消耗大量時(shí)間且過程復(fù)雜繁瑣。LabSolutions MD是一款支持方法開發(fā)的專用軟件，通過對(duì)不同參數(shù)的設(shè)定，可自動(dòng)生成分析時(shí)間表，提高優(yōu)化效率。在本案例中，設(shè)置了三個(gè)初始濃度及三種不同水平梯度，可生成九種分析方案（圖3），獲得如圖4所示的分析結(jié)果。其中方案③分離度最好。

圖2 分離條件優(yōu)化前色譜圖

圖3 LabSolutions MD自動(dòng)生成分析方案

圖4 LabSolutions MD優(yōu)化分離條件結(jié)果

方法③為最優(yōu)選擇

上樣量的優(yōu)化

在前序優(yōu)化條件下，分別注入10、20、30、40、50和100µL的氫化可的松溶液（10000mg/L）。在100μL進(jìn)樣時(shí)，氫化可的松和水楊酸的分離并不充分（圖5中藍(lán)色橢圓內(nèi)），同時(shí)出現(xiàn)了一個(gè)未知的小峰（圖5中紅色圓圈），表明氫化可的松沒有完全分離。而當(dāng)進(jìn)樣量為50µL時(shí)，氫化可的松與相鄰峰分離良好。因此，采用50µL為分析條件進(jìn)樣量。

完成上述工作后，根據(jù)制備柱及分析柱之間橫截面積比將已優(yōu)化分析條件放大至制備規(guī)模，進(jìn)行制備純化過程。

圖5 不同上樣量的優(yōu)化結(jié)果

目標(biāo)化合物的收集

當(dāng)完成條件優(yōu)化后，將方法放大至制備規(guī)模進(jìn)行目標(biāo)化合物的收集。使用紫外檢測(cè)器信號(hào)觸發(fā)收集。放大后，氫化可的松與水楊酸之間保持充分分離的狀態(tài)（圖6）。

圖6 UV觸發(fā)制備色譜圖

純度及回收率的確認(rèn)

利用LH-40可進(jìn)樣的特點(diǎn)，將已收集的氫化可的松重新注入分析流路進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)將氫化可的松標(biāo)準(zhǔn)混合溶液進(jìn)樣分析。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品及回收目標(biāo)化合物純度色譜圖，采用面積歸一化法，獲得的目標(biāo)化合物純度以及回收率均保持在較高的水平。

圖7 純度檢測(cè)色譜圖

總結(jié)

利用島津分析制備雙流路系統(tǒng)與LabSolutions MD軟件的高效結(jié)合，可以將制備純化分析的全過程統(tǒng)一于單一系統(tǒng)完成。該流程包括在分析規(guī)模上優(yōu)化分離條件、擴(kuò)大分餾規(guī)模以及確認(rèn)純度和回收率等?？梢杂行У奶岣咧苽湫?，同時(shí)降低成本，減少實(shí)驗(yàn)過程中人為因素的干擾。

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