島津企業(yè)管理(中國)有限公司

利用尺寸排阻色譜法(SEC)進(jìn)行符合USP規(guī)定的抗體藥物分析

時間:2025-1-16 閱讀:108
分享:

?

 

圖片包含 圖形用戶界面

描述已自動生成 

 

蛋白質(zhì)在生產(chǎn)和儲存過程中容易因溫度、pH及濃度的變化而發(fā)生聚集。聚集會影響如單克隆抗體(mAbs)等蛋白質(zhì)產(chǎn)品的安全性和有效性,因此需要通過專用的分析程序?qū)Ξa(chǎn)品的聚集程度進(jìn)行確認(rèn),而尺寸排阻色譜法(SEC)是一種可用于確認(rèn)聚集的方法。在USP NF2022通則<129>中描述了使用SEC分析單克隆抗體中雜質(zhì)的方法。由于該方法采用高濃度鹽洗脫液,這可能會導(dǎo)致儀器因為沉淀和腐蝕而損壞,因此本文介紹了采用生物惰性高效液相色譜儀Nexera lite inert系統(tǒng)進(jìn)行USP合規(guī)的單克隆IgG抗體SEC分析,此系統(tǒng)比使用不銹鋼部件的HPLC更耐鹽和酸。

 

Nexera lite inert系統(tǒng)優(yōu)勢

圖形用戶界面, 圖示

描述已自動生成 

• 優(yōu)異的靈敏度和回收率——更大限度降低因金屬吸附而造成的損失

• 出色的耐受性和分離度——輕松應(yīng)對高鹽濃度和極端pH流動相的挑戰(zhàn)

• 更高的可靠性和重現(xiàn)性——避免金屬管路對化合物的吸附

 

應(yīng)用

前處理

樣品:通過向2mg單克隆IgG抗體標(biāo)準(zhǔn)品中加入200μL的洗脫液,制備測試樣品,使其濃度達(dá)到10mg/mL,進(jìn)行分析。

 

分析條件

色譜柱 :TSKgel G3000 SWXL(300mm×7.8mm I.D.,5μm)

洗脫液 :200mmol/L磷酸鉀緩沖液(含250mmol/L氯化鉀水溶液,pH=6.2)

流速   :0.5mL/min

柱溫   :25℃

進(jìn)樣量 :25μL

檢測器 :UV,280nm

 

實驗結(jié)果

① 校準(zhǔn)曲線及色譜圖:圖中顯示了單克隆IgG抗體標(biāo)準(zhǔn)溶液(10mg/mL)色譜圖(黑色)和校準(zhǔn)曲線(藍(lán)色)。色譜圖中四個色譜峰的洗脫順序符合USP中規(guī)定的各色譜峰洗脫要求。校準(zhǔn)曲線分子量范圍為13.7kDa~500kDa。

圖示

描述已自動生成 

單克隆IgG抗體標(biāo)準(zhǔn)溶液(10mg/mL)色譜圖(黑色)和校準(zhǔn)曲線(藍(lán)色)

 

② 峰面積:采用面積歸一化法對各峰面積進(jìn)行分析。高分子量(聚合物+二聚體)峰面積為0.53%,單體峰面積為99.4%,小分子碎片峰面積為0.04%,均符合USP規(guī)定中對物質(zhì)峰面積的系統(tǒng)適應(yīng)性規(guī)定。

峰面積結(jié)果

圖片 

 

③ 重現(xiàn)性:對單克隆IgG抗體標(biāo)準(zhǔn)品連續(xù)6次進(jìn)樣分析,保留時間重現(xiàn)性RSD為0.03%,峰面積重現(xiàn)性RSD為0.01%,重現(xiàn)性良好。

保留時間及峰面積結(jié)果(n=6)

圖片 

 

結(jié)論

采用Nexera lite inert系統(tǒng)進(jìn)行符合USP規(guī)定的單克隆IgG抗體的SEC分析。分析結(jié)果表明各項指標(biāo)均符合USP規(guī)定中對系統(tǒng)適應(yīng)性的要求。峰面積重現(xiàn)性RSD為0.01%,保留時間重現(xiàn)性RSD為0.03%,表明在高濃度鹽洗脫液條件下,Nexera lite inert系統(tǒng)仍然提供良好的分析重現(xiàn)性,有助于抗體藥物的分析。

 

本文內(nèi)容非商業(yè)廣告,僅供專業(yè)人士參考。

 

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復(fù)您~
撥打電話 產(chǎn)品分類
在線留言