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島津云學(xué)院丨課后答疑系列 液相色譜篇
“島津云學(xué)院”系列開(kāi)播以來(lái),得到了眾多用戶的觀看和支持。在直播互動(dòng)交流中,收到了很多提問(wèn),島津十分重視各位用戶提出的問(wèn)題,今天將開(kāi)啟島津云學(xué)院答疑系列,為大家作詳細(xì)解答!
請(qǐng)問(wèn)老師一般液相廢液怎么處理?
答:需要明確的是,液相色譜的廢液中含有大量的有機(jī)溶劑以及所測(cè)試的樣品,大部分情況下是有毒有害的,因此不能直接傾倒至環(huán)境中,或者流入實(shí)驗(yàn)室下水道中,需要集中處理。一般而言,可以根據(jù)不同的情況進(jìn)行處理:
1、如果廢液量較少:如分析型色譜的廢液,可先行收集,然后等待集中處理(尤其是含有劇毒成分的),比如尋找專業(yè)的廢液回收機(jī)構(gòu);如果所在單位/機(jī)構(gòu)不支持集中處理,則可以找安全的地方焚燒或填埋(含酸的需用廢堿中和,含鹽的可以直接倒掉)。
2、廢液量很大:如制備色譜的廢液,則考慮通過(guò)精餾系統(tǒng),將廢液分餾后再次使用。
3、也可以通過(guò)“循環(huán)閥”,將未污染的流動(dòng)相再次回收利用。如島津針對(duì)分析型液相和制備型液相都可以提供相應(yīng)的“溶劑循環(huán)閥”,將分析過(guò)程中未受到污染的流動(dòng)相,如色譜峰之間平直的基線(僅限于等度條件下)回收至溶劑瓶中,將能夠大大提升溶劑使用效率,降低實(shí)驗(yàn)室成本。
新買(mǎi)色譜柱如何進(jìn)行測(cè)試?
答:對(duì)于液相色譜柱來(lái)講,拿到一根新的色譜柱,先測(cè)柱效、拖尾因子、柱壓(減去系統(tǒng)壓力),并記錄結(jié)果。
之后使用過(guò)程中應(yīng)定期測(cè)試,追蹤色譜柱性能。因不同類型色譜柱差別較大,因此對(duì)于所使用的方法,請(qǐng)根據(jù)說(shuō)明書(shū)上的液相條件和測(cè)試樣品進(jìn)行,同時(shí)需要確保儀器的狀態(tài)正常。
色譜柱用什么沖洗?
答:反相與正相體系清洗方式有所不同:
反相色譜柱
1、日常清洗:10%甲醇水(去除極性大的雜質(zhì))→純甲醇(去除非極性雜質(zhì))。
2、流動(dòng)相中含有離子對(duì)試劑:50%有機(jī)溶劑(10倍柱體積)→10%有機(jī)溶劑(20倍柱體積)→100%有機(jī)溶劑(20倍柱體積)→保存。
3、生物樣品(蛋白質(zhì)/多肽)污染的色譜柱:B 5% →B 100%的梯度洗脫×3次(A:0.1%TFA B:0.1%TFA in CH3CN)→100%有機(jī)溶劑(20倍柱體積)→保存。
正相色譜柱
親水性雜質(zhì)吸附太強(qiáng),常規(guī)清洗效果不明顯,可以逐級(jí)增加洗脫強(qiáng)度,每級(jí)至少確保10倍柱體積。
I級(jí):100%正己烷
II級(jí):100%乙酸乙酯
III級(jí):50%三氯甲烷-50%甲醇
注意:回歸到初流動(dòng)相條件時(shí),請(qǐng)務(wù)必先用異丙醇過(guò)渡。
用反相色譜的液相系統(tǒng)可以跑正相嗎?剛剛老師提到用異丙醇沖洗管路,那我跑完反相的用異丙醇沖洗是不是就可以跑正相了?
答:一般來(lái)講,當(dāng)把一臺(tái)液相色譜儀即當(dāng)作正相色譜用,也當(dāng)做反相色譜用的時(shí)候,在兩個(gè)不同分析模式之間切換時(shí)需要用異丙醇做充分的過(guò)渡(比如通宵低流速異丙醇沖洗管路),其主要是利用異丙醇可以分別與正/反相溶劑互溶的特性,避免流動(dòng)相殘留造成的影響。
但有一點(diǎn)需要注意的是,所使用的液相色譜儀是否適用于正相溶劑。通常液相色譜儀的主要設(shè)計(jì)目的是適用于反相體系使用,因此在使用正相體系前,好與供應(yīng)商確認(rèn),尤其是使用特殊溶劑前(如HFIP,DMF等)。
如您還有其他關(guān)于液相色譜的疑問(wèn),請(qǐng)掃描以下二維碼提交問(wèn)題,小編會(huì)把問(wèn)題交給講師解答,答案將在后續(xù)答疑系列中推送,敬請(qǐng)留意。
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