LC/MS/MS系統(tǒng)愈來愈多地受到人們的重視，一些的分析儀器公司和研究機(jī)構(gòu)建立多個(gè)研究實(shí)驗(yàn)室參于研究開發(fā)?？傊?，為應(yīng)用目的而建立的LC/MS/MS系統(tǒng)會(huì)越來越多，應(yīng)用研究課題也會(huì)越來越多。

　　LC/MS/MS系統(tǒng)已成為現(xiàn)代分析手段中*的組成部分。LC／MS的聯(lián)用始于70年代，90年代以來，由于大氣壓電離的成功應(yīng)用以及質(zhì)譜本身的發(fā)展，液相色譜與質(zhì)譜的聯(lián)用，特別是與串聯(lián)質(zhì)譜(MS/MS)的聯(lián)用得到了極大的重視和發(fā)展。LC-MS／MS聯(lián)用的優(yōu)點(diǎn)非常顯著，因?yàn)闅庀嗌V只能分離易揮發(fā)且不分解的物質(zhì)，而液相色譜則把分離范圍大大拓寬了，生物大分子也能分離，LC與高選擇性、高靈敏度的MS／MS結(jié)合，可對(duì)復(fù)雜樣品進(jìn)行實(shí)時(shí)分析，即使在LC難分離的情況下，只要通過MS1及MS2對(duì)目標(biāo)化合物進(jìn)行中性碎片掃描，則可發(fā)現(xiàn)并突出混和物中的目標(biāo)化合物，顯著提高信噪比。

　　液-質(zhì)聯(lián)用是通過一個(gè)“接口”來實(shí)現(xiàn)的。在接口研制方面，前后發(fā)展了有20多種，其中主要有直接導(dǎo)入界面、傳送帶界面、滲透薄膜界面、熱噴霧界面和粒子束界面，但這些技術(shù)都有不同方面的限制和缺陷，直到大氣壓電離技術(shù)成熟后，液-質(zhì)聯(lián)用才得以迅速發(fā)展，成為科研和日常分析的有力工具。2接口基本原理

　　有關(guān)各種電離技術(shù)文獻(xiàn)已有評(píng)述，目前主要采用大氣壓電離(API)技術(shù)，API包括電噴霧電離(跚)和大氣壓化學(xué)電離(APCI)。

　　2．1電噴霧電離(ESI)

　　溶液中樣品流出毛細(xì)管噴口后，在霧化氣(N2)和強(qiáng)電場(chǎng)(3～6kV)作用下，溶液迅速霧化并產(chǎn)生高電荷液滴。隨著液滴的揮發(fā)，電場(chǎng)增強(qiáng)，離子向液滴表面移動(dòng)并從表面揮發(fā)，產(chǎn)生單電荷或多電荷離子。通常小分子得[M+H]+或[M-H]-單電荷離子，生物大分子產(chǎn)生多電荷離子，由于質(zhì)譜儀測(cè)量的是質(zhì)，荷比(m/z)，可測(cè)定的生物大分子的質(zhì)量數(shù)高達(dá)幾十萬。

　　ESI是很軟的電離，可直接測(cè)定熱不穩(wěn)定的極性化合物，多電荷形成可分析蛋白質(zhì)和DNA等生物大分子，調(diào)節(jié)離子源(源內(nèi)ID))電壓可以控制離子的斷裂，給出結(jié)構(gòu)信息。

　　2．2大氣壓化學(xué)電離(APCI)

　　溶液中樣品流出毛細(xì)管后仍由氮?dú)饬黛F化到加熱管中被揮發(fā)，在加熱管端的Corona放電電極(zui初利用同位素Ni的電子放射)使溶劑分子形成反應(yīng)氣等離子體。樣品分子與等離子體通過氫質(zhì)子交換被電離，形成[M+H]+或[M-H]-，并進(jìn)入質(zhì)譜儀。

　　APCI也是很軟的電離，只產(chǎn)生單電荷峰，適合測(cè)定弱極性的小分子化合物。另外，它適應(yīng)高流量的梯度洗脫，高低水溶液變換的流動(dòng)相。通過調(diào)節(jié)離子源電壓，可以得到不同斷裂的質(zhì)譜圖。

　　2．3接口形式

　　接口是液-質(zhì)聯(lián)用的關(guān)鍵部分，在這里完成溶液的氣化和樣品分子的電離。由于大量生物樣品的背景基底非常復(fù)雜，即使經(jīng)過分離，還會(huì)很“臟”。因此在接口設(shè)計(jì)時(shí)，既要考慮離子化的效率，亦要考慮接口的抗污染和耐用。圖給出了幾種不同的API“接口”形式，采用Z字形通道離子束引進(jìn)系統(tǒng)，避免了中性或非揮發(fā)性物質(zhì)直接進(jìn)入采樣孔，可有效地防止接口的玷污。3應(yīng)用

　　LC/MS/MS系統(tǒng)是繼GC／MS聯(lián)用之后又一新興的分離檢測(cè)技術(shù)，近來發(fā)展極為迅速。它在生命科學(xué)、環(huán)境科學(xué)、法醫(yī)學(xué)、商檢等領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。

　　3．1藥物及體內(nèi)藥物分析

　　藥物的是用來預(yù)防、診斷及治療疾病的一類特殊物質(zhì)，與人們的健康和生命安危有極其密切的關(guān)系，雜質(zhì)檢查及其限度控制是保證藥品質(zhì)量的一個(gè)重要方面。使用LC/MS/MS系統(tǒng)可以簡(jiǎn)便地對(duì)藥物中雜質(zhì)加以監(jiān)控。Nicolas對(duì)抗癌藥物DuP941生產(chǎn)中有關(guān)雜質(zhì)建立了LC/MS/MS系統(tǒng)指紋圖譜，不同生產(chǎn)的批次藥物與已建立的譜圖對(duì)照，從而達(dá)到質(zhì)量控制目的。Zhao鑒別和測(cè)定了氯沙坦片劑在儲(chǔ)存過程中產(chǎn)生的微量降解產(chǎn)物。Rourick建立了鑒定藥品雜質(zhì)及降解產(chǎn)物的LC/MS/MS系統(tǒng)方法，如頭孢羥氨芐通過酸堿或加熱處理使其降解，然后反相C18柱分離，利用MS／MS功能來鑒定雜質(zhì)及降解產(chǎn)物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。

　　體內(nèi)藥物分析是測(cè)定體液(主要是血漿、血清或全血)中藥物或其他代謝物濃度。由于血液樣品試樣提供量少，基質(zhì)復(fù)雜，在此混合物中分析某種微量成分(通常為(g/mL或ng/mL水平)并加以鑒別，常常是對(duì)分析化學(xué)家的挑戰(zhàn)。

　　LC/MS/MS系統(tǒng)雖然有足夠的靈敏度，但遇到LC難以分離的組分，其應(yīng)用受到限制。使用LC-MS／MS可以克服背景干擾，通過MS／MS的選擇反應(yīng)控制模式(SRM)或多反應(yīng)檢測(cè)模式(SRM)，提高信噪比，因此對(duì)復(fù)雜樣品仍可達(dá)到很高的靈敏度。LC/MS/MS系統(tǒng)對(duì)生物樣品的提取、純化和濃縮等前處理過程沒有嚴(yán)格要求，一般采用液液萃取法(LLE)或固相萃取法(SPE)，但這兩種方法的缺點(diǎn)是比較費(fèi)時(shí)。在線萃取技術(shù)在省時(shí)和省力方面顯出相當(dāng)大的*性?，F(xiàn)有幾種在線萃取技術(shù)，如在線固相萃取、柱切換、涂層毛細(xì)管微萃取(CCME，有時(shí)又稱固相微萃取(SPME)、多元LC系統(tǒng)等。在線萃取技術(shù)使得LC-MS／MS優(yōu)點(diǎn)更加明顯，它可以實(shí)現(xiàn)微量、高通量樣品分析。

　　Xia用兩根平行的樣品前處理柱OasisHLB(1×50mm，3μm)分別與一根分析柱相連接，利用柱切換技術(shù)在兩根平行的樣品處理柱之間交替進(jìn)行凈化、富集。此方法的樣品量?jī)H為10μL，凈化時(shí)間0.3min，整個(gè)樣品分析時(shí)間1.6min，而且方法精密度很好，日內(nèi)、日間誤差6.6％。Hempenius將96孔固相萃取裝置與LC/MS/MS系統(tǒng)相聯(lián)，血漿樣品直接注入孔內(nèi)的SPE柱中，凈化后的樣品再經(jīng)LC分離，MS／MS采用選擇反應(yīng)檢測(cè)模式(SRM)，血漿樣品中的氟哌啶醇檢測(cè)限為0.1ng／mL，方法不準(zhǔn)確度<10％，樣品分析時(shí)間約1.9min。Takeshi對(duì)血液或尿液中11個(gè)添加的吩噻嗪類藥物進(jìn)行了分析，LC/MS/MS系統(tǒng)采用SPME法，樣品在毛細(xì)管內(nèi)壁涂層中經(jīng)過選擇性吸附與解吸，再經(jīng)LC分離，MS或MS／MS檢測(cè)。Wong開展了微透析LC/MS/MS系統(tǒng)生物活體分析，方法是將微透析探針直接插入鼠的頸靜脈中，松果體素腹膜內(nèi)注射后，透析液(連續(xù)15h，每隔0.5h)被自動(dòng)注入到1.12-MS／MS儀中進(jìn)行分析，實(shí)時(shí)了解松果體素在體內(nèi)的生化過程及代謝情況。另外，Wong采用相類似的方法，將微透析探針插入鼠腦紋狀體中，對(duì)神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿進(jìn)行微小環(huán)境的活體分析。手性藥物在制藥行業(yè)中有著特殊意義，高通量手性液相串聯(lián)質(zhì)譜可及時(shí)了解對(duì)映體在體內(nèi)代謝過程，是手性藥物研究有力工具。LC/MS/MS系統(tǒng)可以鑒別分析體液中各種類型的藥物，文獻(xiàn)已報(bào)道有：羅丁諾森、茚地那韋、疊氮胸苷、齊多夫定、安替比林、奧美拉唑、恩丹西酮、孕三烯酮、右美沙芬、氟尼縮松、特樂福本、抗炎松、特比奈芬、新伐他丁、利多卡因、苯海拉明、雷帕霉素、利布樂定、福辛普利、普萘洛爾、普羅帕酮等。

　　天然產(chǎn)物(中藥材)成分復(fù)雜，對(duì)這些產(chǎn)物的分析，以及對(duì)其中活性成分鑒定確實(shí)困難。而LC/MS/MS系統(tǒng)可對(duì)天然產(chǎn)物進(jìn)行成分鑒定和測(cè)定，如生曬參中人參皂甙、蒺藜中甾體皂甙、紫杉中紫杉醇、盾葉鬼臼根莖中木酚素和綠茶中兒茶素等。3．2興奮劑，毒品檢測(cè)

　　1980年奧林匹克委員會(huì)把阿片、可卡因、麥角酰二乙胺(LSD)、苯丙胺、大麻、苯二氮卓和促蛋白合成類固醇列為禁用藥物，這些藥物在體內(nèi)主要以代謝產(chǎn)物形式存在。例如，阿片類含有酚羥基或醇基等，很容易與人體內(nèi)的葡糖醛酸結(jié)合；合成類固醇在體內(nèi)以睪酮形式代謝。

　　LC/MS/MS系統(tǒng)可實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)的快速高靈敏度鑒別和測(cè)定，蛋白質(zhì)酶解后，產(chǎn)生多個(gè)肽段，經(jīng)過LC分離，用MS／MS可獲得肽的質(zhì)量譜，因此可對(duì)肽段進(jìn)行鑒別和測(cè)定；通過蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)檢索，可得出蛋白質(zhì)序列信息。利用LC/MS/MS系統(tǒng)還可以開展DNA-藥物結(jié)合態(tài)分析，肽及蛋白質(zhì)與金屬離子配位研究等。