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島津應(yīng)用:LCMS法測(cè)定不同哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基組分差異
哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)一般需加入一定量血清,以提供必要的營(yíng)養(yǎng)成分和細(xì)胞調(diào)節(jié)因子。但是實(shí)際生產(chǎn)時(shí)很難保證不同批次間血清的一致性,而且血清對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞存在潛在的毒性作用和外源污染等。為了避免不同批次間血清的質(zhì)量變動(dòng),提高細(xì)胞培養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性,避免血清對(duì)細(xì)胞的毒性作用和血清源性污染等,很多細(xì)胞培養(yǎng)基開發(fā)商開始研究開發(fā)無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基,即在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入某些組分來(lái)替代血清。因此我們首先需要分析檢測(cè)添加了血清的培養(yǎng)基和未添加血清的培養(yǎng)基之間的差異性,盡可能多地分析培養(yǎng)基中各組分的相對(duì)含量以及不同組分間的配比。
為滿足快速全面分析細(xì)胞培養(yǎng)上清液組分,將基礎(chǔ)碳源、氮源、核苷酸酸、維生素和其他主要代謝物一起檢測(cè)分析,得到更多有關(guān)生物過(guò)程中的詳細(xì)信息,我們開發(fā)出“細(xì)胞培養(yǎng)上清液方法包”。該技術(shù)平臺(tái)采用超液相色譜三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀,僅需17分鐘,即可同時(shí)監(jiān)測(cè)分析95種細(xì)胞培養(yǎng)上清液營(yíng)養(yǎng)成份和代謝物的相對(duì)豐度變化。本文使用島津超液相色譜儀LC-30A和三重四極桿質(zhì)譜LCMS-8050聯(lián)用,利用“細(xì)胞培養(yǎng)上清液方法包”建立了哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和細(xì)胞代謝物的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的同時(shí)分析方法,供相關(guān)人員參考。
島津三重四極桿質(zhì)譜LCMS-8050
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