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LC-MS/MS方法 | 測定血漿中的葉酸及代謝物
閱讀：109發(fā)布時間：2025-1-16
葉酸（維生素 B9）是人體必需的一種水溶性維生素，它在胎兒正常發(fā)育、紅細胞形成、心血管健康、免疫系統(tǒng)和精神健康方面都有非常重要的作用。葉酸在人體細胞中無法合成，因此只能通過從外界攝取獲得。
同時，臨床中妊娠期女性的葉酸（維生素B9）狀態(tài)評估非常重要，能否保證葉酸的合理攝入對孕婦及胎兒的生命和健康有著至關(guān)重要的影響。因此許多國家建議女性從懷孕前一個月或三個月時開始補充葉酸(維生素B9)。
從這種實際需求出發(fā)，Restek 基于 LC-MS / MS 平臺，在 HILIC-Si 色譜柱上建立了孕婦血漿中葉酸及代謝物的檢測方法，針對性地解決相關(guān)的臨床診斷問題。
分析方法
以 Raptor HILIC-Si 柱測定血漿中的葉酸及代謝物，結(jié)果如下：
Restek 色譜圖：LC_CF0698
峰 | tR(min) | 濃度 (ng/mL) | 母離子 | 子離子 |
5-甲酰 四氫葉酸 | 2.23 | 50 | 474.2 | 327.0 |
葉酸 | 2.23 | 25 | 442.2 | 295.0 |
5-甲基 四氫葉酸 | 2.25 | 25 | 460.3 | 313.0 |
色譜條件 | |
色譜柱 | Raptor HILIC-Si (貨號：9310A5E) |
規(guī)格 | 50 mm x 3.0 mm ID |
粒徑 | 2.7 µm |
柱溫 | 30 °C |
標準品 / 樣品 |
|
溶劑 | 乙腈（20 mM 乙酸銨）：水 = 80 : 20，含 10 mg / mL 2-Mercaptoethanol |
濃度 | 樣品前處理后最終濃度 6.25 ng / mL |
進樣量 | 5 µL |
流動相 |
|
A | 水 : 乙腈 = 50 : 50，20 mM 乙酸銨 |
B | 水 : 乙腈 = 20 : 80，20 mM 乙酸銨 |
時間(min) | 流速(mL/min) | %B |
0.00 | 0.5 | 100 |
3.00 | 0.5 | 0 |
3.20 | 0.5 | 0 |
3.21 | 0.5 | 100 |
5.21 | 0.5 | 100 |
最大壓力 | 344 bar |
檢測器 | MS / MS |
離子化方式 | ESI + |
掃描模式 | MRM |
儀器 | UHPLC |
樣品制備 | |
1. 取 380 μL 含有 100μg / mL 2-Mercaptoethanol的血漿（K2EDTA，2x 活性炭處理），加入 20 μL 強化溶液。
2. 渦旋 2 分鐘，以 4000 rpm 離心 2 分鐘。
3. 用 1 mL 甲醇活化 EVOLUTE EXPRESS WAX 30 mg SPE板（Biotage 604-0030-PX01），然后用 1 mL 2% 甲酸）平衡。打開真空泵，將 SPE 板全干燥。
4. 將 400 μL 樣品加載到 SPE 板上并施加真空。
5. 用 1 mL 水清洗 SPE 板,然后抽真空使之全干燥。
6. 以 300 μL 含 5% 氨水的甲醇（含 10 mg / mL 的 2-Mercaptoethanol）作為洗脫溶劑。啟動真空泵進行洗脫。
7. 將提取物在 30°C 下氮氣吹干。
8. 用 200 μL 流動相 B（含 10 mg / mL 2-Mercaptoethanol）復溶，進行上機測試。
* 注：整個樣品制備過程是在昏暗的燈光下進行的。 | |
解決方案
除此之外，Restek 還可提供同時分析多種水溶性維生素解決方案：
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更多臨床診斷、治療藥物監(jiān)測應(yīng)用，詳見下方《Restek 生命健康領(lǐng)域液相解決方案》。您需要的這里都能找到哦！
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