 |
上海橋星貿(mào)易有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 進(jìn)口透析袋,密理博ECL發(fā)光液,B27無血清培養(yǎng)基,Gibco膠原酶 |
會(huì)員.png)
10
聯(lián)系電話
|
上海橋星貿(mào)易有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 進(jìn)口透析袋,密理博ECL發(fā)光液,B27無血清培養(yǎng)基,Gibco膠原酶 |
聯(lián)系電話
2023-7-25 閱讀(829)
共聚焦實(shí)驗(yàn)中培養(yǎng)耗材的選擇
激光共聚焦顯微鏡可以觀察到細(xì)胞內(nèi)已經(jīng)標(biāo)記好的蛋白質(zhì)和分子，為生物學(xué)研究提供了更直觀的觀測(cè)方法。如今，激光共聚焦成像已經(jīng)是一個(gè)非常常規(guī)的實(shí)驗(yàn)操作，應(yīng)用于生物學(xué)各個(gè)研究領(lǐng)域中。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，如果要進(jìn)行一次激光共聚焦成像，除了要知道相關(guān)的顯微鏡參數(shù)設(shè)置和操作以外，樣品的準(zhǔn)備也是非常重要的一環(huán)。
爬片的使用
由于激光共聚焦實(shí)驗(yàn)對(duì)觀測(cè)耗材的底部有著比較高的要求，普通的培養(yǎng)皿，培養(yǎng)板或者培養(yǎng)瓶都不能直接用于激光共聚焦成像。
1.比較常用的是使用170μm左右厚度的蓋玻片作為激光共聚焦成像的細(xì)胞載體。但是使用蓋玻片，在實(shí)驗(yàn)操作上是非常麻煩的，有時(shí)候需要將蓋玻片清洗并且烘干滅菌，才能開始使用。2.細(xì)胞爬片，雖然不需要清洗，但是還是需要進(jìn)行包被才能讓細(xì)胞正常貼壁生長(zhǎng)。通常是將處理好爬片直接放在多孔板中，然后鋪細(xì)胞，熒光染色后，再用鑷子將爬片拿出，反過來放在滴有封片劑（甘油配置）的載玻片上，再進(jìn)行成像。如圖一所示：
圖一：使用蓋玻片和細(xì)胞爬片的做免疫熒光方法示意圖。
玻底培養(yǎng)皿/板的使用方法
這里要介紹的方法，大大簡(jiǎn)化了樣品準(zhǔn)備流程，需要用到專為共聚焦實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的共聚焦培養(yǎng)皿。共聚焦培養(yǎng)皿的底部為0.16-0.19mm的硼硅酸鹽玻璃，結(jié)合了標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)皿/板的便利性和蓋玻片的成像優(yōu)勢(shì)，可提供高倍放大顯微鏡及共聚焦圖像分析所需的最佳光學(xué)特性。
所有的操作都在培養(yǎng)皿中進(jìn)行，不再需要鑷子以及繁瑣的清洗，滅菌，包被程序（流程如圖二所示）
圖二：共聚焦專用培養(yǎng)皿的準(zhǔn)備樣品流程，可以直接進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)－染色－成像操作
操作流程
1. 在超凈臺(tái)中打開共聚焦專用培養(yǎng)皿的滅菌包裝，拿出培養(yǎng)皿，加入細(xì)胞懸液，蓋上皿蓋，放入培養(yǎng)箱中靜置，等待細(xì)胞貼壁。常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)置合適密度再取出，進(jìn)行免疫熒光染色。
2. 吸出培養(yǎng)基，以PBS清洗細(xì)胞，再用2%的多聚甲醛PBS溶液固定細(xì)胞。
3. 20分鐘后，吸出固定液，加入0.1%Triton X-100
4. 10分鐘后，吸出Triton，清洗細(xì)胞后加入BSA封閉。
5. 加入抗體熒光染色后，吸出所有試劑，加入封片劑，可以開始共聚焦顯微成像。
使用共聚焦培養(yǎng)皿還有個(gè)好處：往往一個(gè)共聚焦掃描成像持續(xù)時(shí)間很長(zhǎng)，培養(yǎng)皿中的液體非常容易揮發(fā)，共聚焦培養(yǎng)皿有皿蓋，可以減少揮發(fā)。
| 樂樂品牌代理情況 | |
| Viskase聯(lián)合碳化 | 透析袋 |
| Spectrumlabs仕必純 | 透析袋、透析膜片、透析柱、透析袋夾子、濃縮劑、中空纖維管、組織粉碎器、采樣管、移植管、離子交換樹脂 |
| Mei5bio聚合美 | 分子生物學(xué)：PCR、qPCR、RTPCR、超保真PCR、DNA電泳純化、克隆、點(diǎn)突變 |
| SPL | 全線耗材：細(xì)胞培養(yǎng)、發(fā)光分析、微生物學(xué)、冷凍儲(chǔ)存 |
| Solarbio索萊寶 | 全線產(chǎn)品以自營(yíng)品牌為主 |
| Psaitong普西唐 | 全線產(chǎn)品：生命科學(xué)、化合物庫(kù)、精細(xì)化學(xué)、分析化學(xué) |
| Macklin麥克林 | 全線產(chǎn)品，多年代理 |
| Liofilchem利飛馳 | 藥敏紙片、藥敏紙條 |
| Chroamagar科馬嘉 | 顯色培養(yǎng)基 |
| HW杭州微生物 | 干粉培養(yǎng)基、生化鑒定管、藥敏紙片、培養(yǎng)基原料 |
| Fuheng富衡 | 細(xì)胞系、細(xì)胞房消殺抑菌產(chǎn)品 |
| Bioexplorer百澳樂 | 細(xì)胞培養(yǎng)基、進(jìn)口免分裝胎牛血清、胰酶雙抗平衡鹽，細(xì)胞轉(zhuǎn)染 |
| Cellmax賽澳美 | 國(guó)產(chǎn)胎牛血清，特殊血清，胰酶雙抗，細(xì)胞培養(yǎng)添加劑 |
| 鄭州盈圣 | 國(guó)產(chǎn)動(dòng)物血清、動(dòng)物全血，尤其適合工業(yè) |
| MCE | 全線產(chǎn)品：信號(hào)通路、染料、多肽、蛋白、天然產(chǎn)物、抑制劑、化合物庫(kù)、試劑盒 |
| Smartbuffers | 各種干粉速溶顆粒緩沖液沖劑、片劑，特色產(chǎn)品訂制 |
| 美基 | RNA/DNA核酸提取 |
| 雅酶【不允許上平臺(tái)】 | WB產(chǎn)品 |
| 美國(guó)Formumax | 氯氟松，巨噬細(xì)胞去除劑 |
