細胞轉(zhuǎn)染技術(shù)簡介

時間：2016/12/13閱讀：1474

細胞轉(zhuǎn)染技術(shù)是將外源基因?qū)胝婧思毎麅?nèi)的一種實驗技術(shù)。常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)分為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（*轉(zhuǎn)染）和瞬時轉(zhuǎn)染兩類。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是指外源DNA 既可以整合到宿主染色體中，也可能作為一種游離體存在。瞬時轉(zhuǎn)染則指外源DNA/RNA 不整合到宿主染色體中，一個宿主細胞中可存在多個拷貝數(shù)，產(chǎn)生高水平的表達，但通常只持續(xù)幾天，多用于啟動子和其它調(diào)控元件的分析。

轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過物理方法將基因?qū)爰毎姆独?/span>;化學(xué)介導(dǎo)方法很多，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù);生物介導(dǎo)方法，有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染，和現(xiàn)在比較多見的各種病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。

各種轉(zhuǎn)染方法的比較

轉(zhuǎn)染方法	原理	應(yīng)用	特點
電穿孔法	高脈沖電壓破壞細胞膜電位，DNA通過膜上形成的小孔導(dǎo)入	穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，瞬時轉(zhuǎn)染均適用。	適用性廣但細胞致死率高；DNA 和細胞用量大；需根據(jù)不同細胞類型優(yōu)化電穿孔實驗條件。
顯微注射	用顯微操作將DNA 直接注入靶細胞核	適用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時轉(zhuǎn)染	轉(zhuǎn)染細胞數(shù)有限，多用于工程改造或轉(zhuǎn)基因動物的胚胎細胞
磷酸鈣法	磷酸鈣DNA復(fù)合物吸附細胞膜被細胞內(nèi)吞	適用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時轉(zhuǎn)染	不適用于原代細胞，操作簡便但重復(fù)性差有些細胞不適用
陽離子脂質(zhì)體法	帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負電的磷酸基團形成復(fù)合物被細胞內(nèi)吞	適用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時轉(zhuǎn)染所有細胞	適用性廣，轉(zhuǎn)染效率高，重復(fù)性好，但轉(zhuǎn)染時需除血清；轉(zhuǎn)染效果隨細胞類型變化大
DEAE-右旋糖苷法	帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成的復(fù)合物被細胞內(nèi)吞	瞬時性轉(zhuǎn)染	相對簡便、結(jié)果可重復(fù)，但對細胞有一定的毒副作用；轉(zhuǎn)染時需除血清
病毒介導(dǎo)法	通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中	穩(wěn)定轉(zhuǎn)染	可用于難轉(zhuǎn)染的細胞、原代細胞，體內(nèi)細胞等

Mirus是首先研發(fā)出siRNA轉(zhuǎn)染試劑的公司，也是世界上zui早開發(fā)、低細胞毒性轉(zhuǎn)染試劑的公司之一。Mirus以“非病毒(如基于質(zhì)粒DNA)法基因轉(zhuǎn)移技術(shù)比利用病毒來轉(zhuǎn)移基因具有明顯的優(yōu)勢”為理念，沿著該思路，Mirus利用蛋白、多聚物、脂質(zhì)體（結(jié)合有增強核酸轉(zhuǎn)移能力的*化學(xué)物）開創(chuàng)了多種非病毒法基因轉(zhuǎn)移技術(shù)。主要提供的轉(zhuǎn)染試劑有：廣譜性低毒轉(zhuǎn)染試劑、細胞系特異性轉(zhuǎn)染試劑、RNA轉(zhuǎn)染試劑、昆蟲轉(zhuǎn)染試劑、3D培養(yǎng)細胞轉(zhuǎn)染試劑和電轉(zhuǎn)試劑等。

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