產(chǎn)品名稱(chēng)：納米長(zhǎng)PCR試劑盒            

產(chǎn)品目錄號(hào)：NHS21-1

產(chǎn)品說(shuō)明：本試劑盒適用于長(zhǎng)PCR擴(kuò)增（≦20kb）。產(chǎn)品定位于解決目前市場(chǎng)上難于擴(kuò)增的若干PCR反應(yīng)。納米PCR是納米材料輔助的基因擴(kuò)增技術(shù),研究表明某些納米材料可以增強(qiáng)基因擴(kuò)增的總效率。

納米長(zhǎng)PCR試劑盒25ul/100次 配置如下：

4×NanoPCR buffer 1 (800ul，已包含dNTPs和Mg²⁺)；

4×NanoPCR buffer 2 (800ul，已包含dNTPs和Mg²⁺)；

4×NanoPCR buffer 3 (800ul，已包含dNTPs和Mg²⁺)；

MgCl₂ (25 mM) (500ul)；

LPCR enzyme Mix (5 U/ul) (40ul)

納米長(zhǎng)PCR試劑盒使用建議：

• 本試劑盒配備了三種PCR buffer，建議同時(shí)嘗試三種buffer，一開(kāi)始不用額外添加MgCl₂。選擇的引物和buffer進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)操作。納米材料容易團(tuán)聚，每次使用前請(qǐng)輕輕搖勻后使用。PCR產(chǎn)物中含有的納米材料一般不影響電泳等后續(xù)操作。
• PCR反應(yīng)體系中各參數(shù)加量參考如下：

建議使用2步法擴(kuò)增長(zhǎng)PCR。一個(gè)典型的長(zhǎng)PCR反應(yīng)程序（舉例：從Lambda DNA擴(kuò)增一個(gè)12-18kb的DNA片斷）如下：[92℃-2min]；[92℃-20s，65℃-6min]×30 cycles；[72℃-10min]（循環(huán)數(shù)可按照PCR產(chǎn)物的多少適當(dāng)調(diào)節(jié)）. 如果不確定*退火/延伸溫度，可以先做梯度PCR確定*退火/延伸溫度[65-69℃]。退火/延伸時(shí)間可以依據(jù)目標(biāo)長(zhǎng)度來(lái)調(diào)節(jié)，一般在2-10分鐘。

• 批量PCR需要計(jì)算好實(shí)驗(yàn)中所需要的mix總量以及需要單獨(dú)加入PCR體系中的成分和量。例：做以不同基因組為模板的9管12ul體系的PCR。計(jì)入加樣損耗，按10管加量計(jì)算。試驗(yàn)操作全過(guò)程建議在冰盒上進(jìn)行。

將mix做好，上下反復(fù)震蕩15-20下后再渦旋震蕩5秒，離心（大約待離心機(jī)轉(zhuǎn)到7000rpm停下）。向每個(gè)PCR管加入mix并用槍頭混合3下使均勻。放入PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增。比較容易出現(xiàn)的問(wèn)題是mix混合不均勻。

參考文獻(xiàn)：

Haikuo Li et al.  Nanoparticle PCR: Nanogold-assisted PCR with enhanced specificity. Angew. Chem. Int. Ed. 2005, 44(32):5100-3

Zhizhou Zhang et al. Aqueous suspension of carbon nanopowder enhances the efficiency of polymerase chain reaction. Nanotechnology, 18 (2007) 355706

Zhizhou Zhang et al. Aqueous suspension of carbon nanotubes enhances the efficiency of long PCR. 2008, Biotechniques, 44(4):537-545

保存溫度：-20℃

保質(zhì)期：12個(gè)月

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納米長(zhǎng)PCR試劑盒上海滬崢

納米材料與DNA結(jié)合的若干基礎(chǔ)研究國(guó)外做得比較多，目前利用納米材料的*的催化性能或與諸多分子（蛋白質(zhì)、核酸，有機(jī)小分子等）的結(jié)合性能?chē)?guó)內(nèi)外正在開(kāi)展大量的應(yīng)用技術(shù)研究，國(guó)內(nèi)的若干研究室已經(jīng)做出了出色的工作。但是納米材料能夠在一般基因擴(kuò)增技術(shù)無(wú)能為力或效率不高的情況下擴(kuò)增出來(lái)目的DNA，并且明顯增加了擴(kuò)增專(zhuān)一性和靈敏度，是在上*發(fā)現(xiàn)。目前我們是納米基因擴(kuò)增技術(shù)研究的者之一。由于基因擴(kuò)增技術(shù)屬于上百個(gè)DNA技術(shù)中的主要技術(shù)環(huán)節(jié)，一旦它具備了把絕大部分現(xiàn)行PCR技術(shù)升級(jí)換代的優(yōu)勢(shì)，它將進(jìn)入核酸試劑巨大的市場(chǎng)，應(yīng)用價(jià)值相當(dāng)可觀。通過(guò)本研究我們應(yīng)該比較清楚納米材料催化基因擴(kuò)增的若干機(jī)制，極有可能在此基礎(chǔ)上研制出更好的基因操作技術(shù)。

我們?cè)谘芯考{米PCR機(jī)制的基礎(chǔ)上，重點(diǎn)加強(qiáng)納米基因擴(kuò)增技術(shù)在完整基因擴(kuò)增中的應(yīng)用，使用上述三個(gè)指標(biāo)(特異性、靈敏度以及穩(wěn)定性)來(lái)衡量納米基因擴(kuò)增技術(shù)以及它與其他分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合的組合技術(shù)，能否解決不同長(zhǎng)度的基因組完整基因序列在擴(kuò)增時(shí)同樣面臨的這三個(gè)問(wèn)題。我們還將直接使用血液和尿液作為基因組DNA的存在條件來(lái)考察納米PCR與一般PCR在上述指標(biāo)上的比較研究。 另外，由于基因組技術(shù)(不是一般意義上的基因技術(shù))越來(lái)越重要,研究基因時(shí)不能像以前一般主要注意基因所轉(zhuǎn)錄出來(lái)的mRNA或mRNA對(duì)應(yīng)的cDNA了,包含基因內(nèi)所有調(diào)控等信息的DNA 片段越來(lái)越多地被研究，它們需要在一起被擴(kuò)增,即完整基因的擴(kuò)增將愈發(fā)重要。當(dāng)然基因間的非編碼區(qū)序列被認(rèn)為甚至更重要,它們也越來(lái)越多地需要被擴(kuò)增出來(lái)加以研究. 初步研究表明納米基因擴(kuò)增技術(shù)在擴(kuò)增10-15kb長(zhǎng)度的長(zhǎng)片段DNA時(shí)比一般PCR技術(shù)有明顯優(yōu)勢(shì)。我們正在設(shè)計(jì)人類(lèi)基因組第21號(hào)染色體上全部基因（533個(gè)）的對(duì)比擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)，先擴(kuò)增幾十個(gè)基因，從統(tǒng)計(jì)上確立納米基因擴(kuò)增在基因組中完整基因大規(guī)模擴(kuò)增的技術(shù)優(yōu)勢(shì)；在上述研究基礎(chǔ)上建立初步通用的完整基因擴(kuò)增方案。通過(guò)上述研究，希望納米基因擴(kuò)增技術(shù)能夠成為解決生物醫(yī)學(xué)研究和應(yīng)用領(lǐng)域中基因擴(kuò)增之特異性、高靈敏度和穩(wěn)定性（或三個(gè)指標(biāo)之一）等重大問(wèn)題的關(guān)鍵技術(shù)。

基因擴(kuò)增技術(shù)發(fā)明了二十多年，直到2004年過(guò)期，其技術(shù)水平也沒(méi)有達(dá)到對(duì)擴(kuò)增結(jié)果的可預(yù)測(cè)程度。但是PCR技術(shù)體系并不能被認(rèn)為是很復(fù)雜的反應(yīng)體系，至少其組成就是DNA模板、引物、聚合酶、dNTPs及緩沖系統(tǒng)，不能算是很復(fù)雜的體系。 我們認(rèn)為應(yīng)該可以實(shí)現(xiàn)擴(kuò)增結(jié)果的可預(yù)測(cè)性。目前的PCR引物設(shè)計(jì)軟件已經(jīng)比較成熟。我們選取PRIMER3.1 進(jìn)行設(shè)計(jì)，利用TAQ酶和PFU酶系統(tǒng)一次擴(kuò)增一批序列，把實(shí)驗(yàn)結(jié)果分為一次擴(kuò)增成功和一次擴(kuò)增失敗。國(guó)內(nèi)外每天應(yīng)用PCR技術(shù)的實(shí)驗(yàn)室何止成千上萬(wàn)，如果PCR技術(shù)可以預(yù)測(cè)結(jié)果，將節(jié)約大量實(shí)驗(yàn)成本并開(kāi)辟一個(gè)巨大的市場(chǎng)。

納米PCR產(chǎn)品可以作為現(xiàn)有市場(chǎng)PCR產(chǎn)品的有利補(bǔ)充，廣大的PCR試劑使用者手上將陸續(xù)又多出一批增加基因擴(kuò)增成功率的好幫手。今后幾年內(nèi)研制出來(lái)一批既有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)又有實(shí)用價(jià)值的納米PCR試劑盒，推動(dòng)納米生物技術(shù)的應(yīng)用發(fā)展。