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分析型液相色譜系統(tǒng)的適用性試驗(yàn)

時(shí)間:2016-12-20 閱讀:2839
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     分析型液相色譜系統(tǒng)采用高壓輸液系統(tǒng),將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱,在柱內(nèi)各成分被分離后,進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè),從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。該方法已成為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)。
    分析型液相色譜系統(tǒng)可反復(fù)使用、樣品不被破壞、易回收等優(yōu)點(diǎn),但也有缺點(diǎn),與氣相色譜相比各有所長(zhǎng),相互補(bǔ)充。液相色譜的缺點(diǎn)是有“柱外效應(yīng)”。在從進(jìn)樣到檢測(cè)器之間,除了柱子以外的任何死空間(進(jìn)樣器、柱接頭、連接管和檢測(cè)池等)中,如果流動(dòng)相的流型有變化,被分離物質(zhì)的任何擴(kuò)散和滯留都會(huì)顯著地導(dǎo)致色譜峰的加寬,柱效率降低。液相色譜檢測(cè)器的靈敏度不及氣相色譜。
    分析型液相色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的設(shè)計(jì)與實(shí)驗(yàn)?zāi)康母悠ヅ?/div>
    系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的嚴(yán)格細(xì)膩程度取決于實(shí)驗(yàn)?zāi)康?。首先?yīng)考慮色譜系統(tǒng)被用于何種實(shí)驗(yàn),根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康膩?lái)設(shè)計(jì)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。如果一個(gè) HPLC 方法僅用于定性鑒別,就其色譜系統(tǒng)的適用性試驗(yàn)而言可以相對(duì)簡(jiǎn)單寬松,只要可以確保被測(cè)成分峰與其他色譜峰有一定的分離度,具有適宜的出峰時(shí)間即可達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/div>
    如果用于定量分析(如含量測(cè)定),則除要保證被測(cè)成分峰具有適宜的出峰時(shí)間外,還需檢驗(yàn)系統(tǒng)是否能夠保證被測(cè)成分峰與其他色譜峰*分離,分離度一般應(yīng)在1.5以上,同時(shí)還應(yīng)測(cè)試被測(cè)成分峰峰面積的重復(fù)性是否良好,對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣5針的峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2%,被測(cè)成分峰的峰型也應(yīng)基本對(duì)稱,以保證分離效果和測(cè)量精度。對(duì)于小峰(如占總面積10%以下的色譜峰)峰面積的定量,或用峰高法定量時(shí),就應(yīng)對(duì)拖尾因子或?qū)ΨQ因子加以嚴(yán)格的規(guī)定,一般來(lái)說(shuō),拖尾因子應(yīng)在 0.95~1.05之間,因?yàn)榉宓膶?duì)稱性對(duì)測(cè)量結(jié)果影響較大。
    如果檢查某種藥品的有關(guān)物質(zhì),且還需要分別檢查單個(gè)雜質(zhì)和雜質(zhì)總量,那么系統(tǒng)適用性試驗(yàn)還應(yīng)有一個(gè)重點(diǎn),就是要有常見(jiàn)雜質(zhì)難分離物質(zhì)對(duì)分離度的測(cè)定指標(biāo)。此外系統(tǒng)的檢測(cè)靈敏度試驗(yàn)也就相對(duì)比較重要。如鹽酸二甲雙胍的有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)下要求: 鹽酸二甲雙胍與雙氰胺的分離度應(yīng)大于1.5,檢測(cè)靈敏度要求調(diào)節(jié)雙氰胺峰高為滿量程的10%。 如 果色譜系統(tǒng)是一個(gè)梯度洗脫系統(tǒng),有時(shí)一個(gè)難分離物質(zhì)對(duì)分離度的測(cè)試也不能*達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹H绻谔荻茸兓那昂缶行枰獧z測(cè)的雜質(zhì),分離度的測(cè)定指標(biāo)一般應(yīng)根據(jù)需要在梯度變化之前和之后都可加以制訂。在梯度洗脫系統(tǒng)中某個(gè)成分峰的保留時(shí)間也經(jīng)常用來(lái)做系統(tǒng)適用性檢測(cè)的指標(biāo),給出吐峰時(shí)間范圍,如頭孢地尼,主成分頭孢地尼峰的保留時(shí)間要求22分鐘,E-異構(gòu)體峰保留時(shí)間約為33分鐘,理論板數(shù)按頭孢地尼峰計(jì)算應(yīng)不低于 7000。

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