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飼料中喹乙醇的測(cè)定解決方案
前言:
喹乙醇又稱(chēng)喹酰胺醇，商品名為倍育諾、快育靈，是一種化學(xué)合成的生長(zhǎng)促進(jìn)劑，也屬于廣譜抗菌藥物?？纱龠M(jìn)機(jī)體蛋白質(zhì)合成代謝，提高飼料能量利用率，從而加快生長(zhǎng)發(fā)育，提高了個(gè)體瘦肉率。同時(shí)喹乙醇對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌均具有明顯抗菌效果，又不影響有益的腸道微生物菌落，因此對(duì)預(yù)防和控制豬腹瀉病作用顯著。
但是喹乙醇有中度至明顯的蓄積毒性，對(duì)大多數(shù)動(dòng)物有明顯的致畸作用，對(duì)人也有潛在的三致性，即致畸形，致突變，致癌。因此，喹乙醇在美國(guó)和歐盟都被禁止用作飼料添加劑。我國(guó)農(nóng)業(yè)部早在2001年第168號(hào)公告中就作了嚴(yán)格規(guī)定：喹乙醇只能用于體重低于35千克的豬，添加量為50-100ppm的飼料，禁止用于家禽及水產(chǎn)養(yǎng)殖。
盡管如此，為了謀取暴利，仍然有不法分子在飼料中超標(biāo)添加喹乙醇，從而導(dǎo)致喹乙醇在食用肉中殘留，食品安全得不到應(yīng)有的保證。
大連依利特分析儀器有限公司，結(jié)合GB/T 8381.7-2009《飼料中喹乙醇的測(cè)定液相色譜法》，對(duì)飼料中喹乙醇進(jìn)行了分析檢測(cè)，提出了喹乙醇檢測(cè)的全套解決方案。供相關(guān)人員參考。
第1章 飼料中喹乙醇的測(cè)定
1.1 設(shè)備與試劑
表1-1所需化學(xué)試劑和溶液
序號(hào) | 試劑和溶液 | 備注 |
1 | 甲醇 | 色譜純 |
2 | 超純水 | 18.2MΩ |
3 | 鹽酸 | 分析純 |
4 | 提取液：甲醇/水(5/95) | 配制 |
5 | 淋洗液1：0.02mol/L鹽酸 | 配制 |
6 | 淋洗液2：0.1mol/L鹽酸 | 配制 |
7 | 淋洗液3：甲醇/水(5/95) | 配制 |
8 | 洗脫液：甲醇/水(40/60) | 配制 |
9 | 喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)品 | 純度＞99.6% |
表1-2主要樣品前處理設(shè)備
序號(hào) | 名稱(chēng) | 規(guī)格型號(hào) | 備注 |
1 | 溶劑過(guò)濾器 | 1000mL | 流動(dòng)相過(guò)濾 |
2 | 隔膜真空泵 | 0.08MPa,160W | 流動(dòng)相過(guò)濾，GM-0.33A |
3 | 超聲清洗器 | 3L/6L, 40/60KHz, 120W | 溶解，流動(dòng)相脫氣，AS3120 |
4 | 精密電子天平 | 感量為萬(wàn)分之一 | 稱(chēng)量 |
5 | 離心機(jī) | 轉(zhuǎn)速可達(dá)3500r/min | 提取 |
6 | 搖床 | 轉(zhuǎn)速可達(dá)110r/min | 提取 |
7 | 螺口離心管 | 50mL | -- |
8 | 微孔有機(jī)相濾膜 | 孔徑0.22μm | 樣品過(guò)濾 |
9 | 固相萃取小柱 | Oasis HLB 1mL | 凈化 |
10 | 固相萃取儀 | 凈化 | |
11 | 恒溫振蕩器 | 提取 |
1.2 實(shí)驗(yàn)方法
【試液制備】
喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱(chēng)取喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)品0.05020g（含量大于99.6%），于50mL棕色容量瓶中，超聲溶解，冷卻至室溫，定容至刻度，搖勻，使其溶液濃度為1mg/mL，儲(chǔ)存于-18℃冰箱中，可使用一個(gè)月。
喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確量取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于容量瓶中，用洗脫液稀釋?zhuān)来闻渲瞥蓾舛葹?0μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL、100.0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。
【樣品前處理】
提取
稱(chēng)取5g試樣（至0.1mg）于具塞錐形瓶中，加入50mL提取液，具塞至于搖床中，室溫下恒溫振蕩器振蕩速度110r/min，避光振蕩45min。提取液在3500r/min下離心10min，上清液經(jīng)濾紙過(guò)濾，濾液作為SPE小柱凈化使用。
凈化
SPE小柱的活化：臨用前分別向SPE小柱中加入2mL甲醇和2mL超純水，對(duì)小柱進(jìn)行活化。將提取濾液2mL加入活化好的SPE小柱，分別用2mL淋洗液1、淋洗液2和淋洗液3淋洗小柱。并將小柱吹干，zui后用2mL洗脫液洗脫。
洗脫液過(guò)0.22μm有機(jī)相濾膜，濾液上機(jī)測(cè)定。
【測(cè)試條件】
流動(dòng)相：甲醇/水，梯度洗脫
表1-3 梯度洗脫表
時(shí)間/min | 超純水/% | 甲醇/% |
0 | 85 | 15 |
5 | 85 | 15 |
10 | 30 | 70 |
14 | 30 | 70 |
18 | 85 | 15 |
25 | 85 | 15 |
色譜柱：Supersil ODS-B (5μm，4.6mm×250mm)
流量：1.0mL/min
檢測(cè)波長(zhǎng)：UV260nm
進(jìn)樣體積：10μL
柱溫：30℃
1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
【分析譜圖】
圖1-1喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)品分析譜圖 1.喹乙醇
【分析結(jié)果】
表1-4喹乙醇測(cè)定結(jié)果
樣品 | 喹乙醇 | 拖尾因子 | 柱效（N/m） |
保留時(shí)間（min） | 9.171 | 1.12 | 52000 |
【線(xiàn)性范圍】
取喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)工作液按照1.2中【測(cè)試條件】進(jìn)行分析得到喹乙醇線(xiàn)性如下表：
樣品名稱(chēng) | 線(xiàn)性方程 | 線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)R2 |
喹乙醇 | Y=68.494x-208.86 | 0.9998 |
由上表可知，喹乙醇樣品在10~100μg/mL的濃度范圍內(nèi)線(xiàn)性良好。
1.4 參考文獻(xiàn)
[1]GB/T 8381.7-2009《飼料中喹乙醇的測(cè)定液相色譜法》。
第2章系統(tǒng)配制
Agress1100系列推薦配置
表2-1Agress1100型液相色譜梯度系統(tǒng)推薦配置清單
序號(hào) | 名稱(chēng) | 數(shù)量 |
1 | D1100紫外-可見(jiàn)檢測(cè)器 | 1臺(tái) |
2 | P1100高壓恒流泵 | 2臺(tái) |
3 | ST1100溶劑脫盤(pán) | 1臺(tái) |
4 | VICI Valco高壓六通進(jìn)樣閥 | 1個(gè) |
5 | VB1110閥支架 | 1個(gè) |
6 | W1100色譜數(shù)據(jù)處理工作站 | 1套 |
7 | GM1100梯度混合器 | 1臺(tái) |
8 | Agress1100系統(tǒng)工具包 | 1套 |
9 | Supersil ODS2 5μm ID4.6×200mm液相色譜柱（標(biāo)配） | 1支 |
10 | Supersil ODS-B 5μm ID4.6×250mm液相色譜柱（推薦） | 1支 |
11 | O1100色譜柱恒溫箱（推薦） | 1臺(tái) |
12 | 500mL溶劑瓶（無(wú)色）（選配） | 2只 |
EClassical 3100系列推薦配置
表2-2EClassical3100型液相色譜梯度系統(tǒng)推薦配置清單
序號(hào) | 名稱(chēng) | 數(shù)量 |
1 | UV3100紫外-可見(jiàn)檢測(cè)器 | 1臺(tái) |
2 | P3100高壓恒流泵 | 2臺(tái) |
3 | Rheodyne 7725i高壓六通進(jìn)樣閥 | 1個(gè) |
4 | ZJ-1閥支架 | 1個(gè) |
5 | W5100色譜數(shù)據(jù)處理工作站 | 1套 |
6 | TP3100溶劑托盤(pán) | 1臺(tái) |
7 | EClassical3100 系統(tǒng)工具包 | 1套 |
8 | TD-1-15梯度混合器 | 1個(gè) |
9 | Supersil ODS2 5μm ID4.6×200mm液相色譜柱（標(biāo)配） | 1支 |
10 | Supersil ODS-B 5μm ID4.6×250mm液相色譜柱（推薦） | 1支 |
11 | O3100色譜柱恒溫箱（推薦） | 1臺(tái) |
12 | 500mL溶劑瓶（無(wú)色）（選配） | 2只 |
13 | S3100自動(dòng)進(jìn)樣器（選配） | 1臺(tái) |
