間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基（HuMSC Medium-serum free）

產(chǎn)品描述

間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基是一款無血清、無動物源成分的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品，主要成分為：氨基酸，維生素、無機(jī)鹽、白蛋白，轉(zhuǎn)鐵蛋白、胰島素、微量元素，細(xì)胞因子等。

本產(chǎn)品可用于間充質(zhì)干細(xì)胞的原代培養(yǎng)及多次傳代，同時還能保持其多向分化的潛能，如分化為骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞的能力，使用時無需添加血清或血清替代物。

訂購信息

產(chǎn)品組分

運(yùn)輸與保存

組分A藍(lán)冰運(yùn)輸，4℃保存；組分B干冰運(yùn)輸，-20℃以下保存。有效期12 個月。

使用方法

1.培養(yǎng)基的配制

取500mL組分A，加入25mL 組分B，混合均勻即為間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基。注：如有需要，使用者可按照比例配制所需用量。

2. 間充質(zhì)干細(xì)胞原代細(xì)胞分離與培養(yǎng)（以T75培養(yǎng)瓶為例）

(1)   取出臍帶，將臍帶外表面消毒并清洗去除血跡，剪成約2cm ~ 4cm的小塊，去除動靜脈，制成邊長5mm ~10mm 的小塊，置于T75培養(yǎng)基瓶中排列整齊，每瓶鋪入15 ~ 20塊。注：需要區(qū)分臍帶外表皮側(cè)和華通膠側(cè)，保證華通膠側(cè)貼在培養(yǎng)瓶底部。

(2)   將培養(yǎng)瓶翻轉(zhuǎn)，置于CO2培養(yǎng)箱中，37℃靜置60 min。

(3)   將培養(yǎng)瓶取出，向培養(yǎng)瓶中緩慢加入15mL 間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基，放入 37℃ 、5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

(4)   第 7天，每個T75培養(yǎng)瓶補(bǔ)加新鮮的間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基5mL。

(5)   補(bǔ)液后每3天進(jìn)行半換液，吸出10mL 培養(yǎng)基棄掉，再加入10mL新鮮的間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基。

(6)   第13天開始，觀察組織塊，如組織塊周圍細(xì)胞融合度達(dá)到 90%，可收獲細(xì)胞，否則繼續(xù)每3天進(jìn)行半換液至組織塊周圍細(xì)胞融合度達(dá)到90%。

3. 間充質(zhì)干細(xì)胞傳代培養(yǎng)與凍存（以T75 培養(yǎng)瓶為例）

(1)  將間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基平衡至室溫。

(2)  清洗：取出細(xì)胞，吸出培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基棄掉，每個T75培養(yǎng)瓶用10mL~15mL PBS 潤洗細(xì)胞一次。

(3)  消化：加入 3ml 消化液，使消化液浸潤整個細(xì)胞生長表面后，置于 CO2 培養(yǎng)箱中，37℃消化  2min ~ 6min，鏡檢觀察，約  80% 以上細(xì)胞回縮變圓并脫落時，加入兩倍體積間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基終止消化，吹打使細(xì)胞分散成單細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

注：若大部分細(xì)胞回縮變圓但不脫落，可輕輕拍打瓶壁使其脫落。若細(xì)胞不脫落，可延長消化時間。

(4)  收集：300g，5min 離心收集細(xì)胞沉淀，棄掉上清。

(5)  傳代/凍存：若進(jìn)行傳代操作，用間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，按照合適的接種密度（推薦8000個細(xì)胞/ cm2）將細(xì)胞接種到已加入平衡至室溫的20mL間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基的 T75培養(yǎng)瓶中，放入 37℃、5%CO2 培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

若凍存細(xì)胞，則將步驟（4）中收集的細(xì)胞沉淀，按凍存密度加入適量細(xì)胞凍存液輕柔吹打重懸細(xì)胞并混勻，轉(zhuǎn)移至細(xì)胞凍存管中，凍存管置于程序降溫盒中，-80℃過夜，24h 后轉(zhuǎn)移至液氮中進(jìn)行長期保存。

4. 間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)蘇（以 T75 培養(yǎng)瓶為例）

(1)  將間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基平衡至室溫，每個培養(yǎng)瓶加入15mL 的間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基。

(2)  取出凍存的細(xì)胞，置入 37℃水浴鍋中快速解凍。

(3)  立即吸取解凍后的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移 1ml 至 15ml 離心管中，逐滴加入 4mL 間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基，混勻后計(jì)數(shù)。

(4)  根據(jù)計(jì)數(shù)結(jié)果，按照合適的接種密度（推薦 8000 個細(xì)胞/cm2）將細(xì)胞接種到已加入 15mL 間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)容器中。

注：若細(xì)胞凍存液中不含 DMSO，可將細(xì)胞直接加入 20mL 間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基中，且不用在第二天換液。

(5)  將細(xì)胞放在 37℃ ,5% CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

(6)  12h~24h 后，待細(xì)胞正常貼壁，棄去培養(yǎng)上清，加入新鮮的、已平衡至室溫的 20ml 間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基。根據(jù)細(xì)胞生長情況，每 3天換液至細(xì)胞融合度達(dá)到 80%~90%。

注意事項(xiàng)

1.    本產(chǎn)品于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

2.    本產(chǎn)品不含抗生素，不建議添加抗生素。如果必須添加抗生素，則應(yīng)優(yōu)化培養(yǎng)條件。

3.    本產(chǎn)品不含有酚紅，不含有血清及動物源成分，如有需要可額外添加。

4.    為了達(dá)到理想的細(xì)胞培養(yǎng)效果，本產(chǎn)品可以直接使用，也可以根據(jù)細(xì)胞類型或研究需求，額外添加需要的細(xì)胞生長因子或激素等。

5.      本產(chǎn)品培養(yǎng)細(xì)胞的效果可能因細(xì)胞來源、儲存條件、樣本質(zhì)量、操作者經(jīng)驗(yàn)而有所差異。

6.    產(chǎn)品應(yīng)在指定的儲存條件下存放，并在有效期內(nèi)使用。

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本產(chǎn)品于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。