LcGreen（20×水溶液）

產(chǎn)品描述
　　LcGreen（20×水溶液）是一種用于實(shí)時定量PCR（qPCR）的DNA 結(jié)合染料。本產(chǎn)品的諸多優(yōu)點(diǎn)使它遠(yuǎn)勝于SYBR Green I，除了有相似的光譜特性，還有三個主要特點(diǎn)使它區(qū)別于SYBR Green I 。
　　首先，LcGreen對PCR的抑制性遠(yuǎn)小于SYBR Green I。因此，使用LcGreen進(jìn)行的qPCR實(shí)驗(yàn)可以使用快速PCR步驟。同時，本產(chǎn)品在實(shí)驗(yàn)中可以使用較高的濃度，從而獲得遠(yuǎn)強(qiáng)于SYBR Green I擴(kuò)增信號。較高濃度也消除了“染料重分布”的缺陷，使本產(chǎn)品既可用于多重PCR，也可用于高分辨率（高清晰）熔解曲線分析（HRM）。該分析正被越來越多的用于PCR后的基因分型和異源雙鏈分析。由于SYBR Green I對PCR的抑制性，從而要求其使用濃度必須很低，因此SYBR Green I無法解決由低濃度造成的染料重分布問題，既不能用于多重PCR也不能用于HRM。同時，染料重分布問題也可能影響常規(guī)熔解曲線的可靠性，因?yàn)榈腿埸c(diǎn)的DNA鏈可能由于這種原因而無法檢測到。     
　　第二，本產(chǎn)品的穩(wěn)定性*。在正常的儲存、操作和PCR過程中不會被破壞。在緩沖溶液中的染料可以安全的儲存在室溫或冰箱里，也可以反復(fù)凍融。與之相反，SYBR Green I不穩(wěn)定而且降解后對PCR抑制性更強(qiáng)。
　　第三，本產(chǎn)品降低了細(xì)胞膜透性，因而比SYBR Green 1更加安全。獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室的測試結(jié)果顯示，本產(chǎn)品既沒有誘變性也沒有細(xì)胞毒性。相反，雖然SYBR Green I本身誘變性很弱，但它在細(xì)胞中可能抑制了正常DNA的修復(fù)機(jī)制，使其有誘變增強(qiáng)作用?？紤]到PCR的廣泛使用，其安全性應(yīng)該足夠重視。
訂購信息

產(chǎn)品參數(shù)
　　λabs/λem = 500/530 nm (結(jié)合DNA)
　　λabs = 471 nm (未結(jié)合DNA)
保存方法
　　4℃或-20℃，避光保存，有效期見外包裝。
使用方法
如下建立實(shí)驗(yàn)體系：（僅供參考）

 
實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>
　　實(shí)時定量PCR檢測20× LcGreen
主要試劑
（1）Prime
hβ-actin：
forward 5’ -CACCCACACTGTGCCCATCTACGA-3’
reverse 5’-CAGCGGAACCGCTCATTGCCAATGG-3’
（2）HS Taq DNA Polymerase: Thermo(EP0612)
（3）Glycerlo: Sigma(V900090-500 mL)
（4）BSA: Sigma(A7030)
（5）10 mM dNTPs: Takara(4019)
實(shí)驗(yàn)方案
1. 配制2× LcGreen Buffer

 
2. 配制 q-PCR反應(yīng)體系

【注】：① DNA 模板的添加量通常在 100 ng 以下，因不同種類的 DNA模板中含有的靶基因的拷貝數(shù)不同，必要時可進(jìn)行梯度稀釋，確定合適的 DNA 模板添加量。cDNA作為模板時的添加量不要超過 PCR 反應(yīng)液總體積的 10%。② 引物終濃度一般控制在0.1-0.5 μM范圍內(nèi)。
3. 實(shí)驗(yàn)分組：標(biāo)準(zhǔn)對照樣品孔（陽性對照）、檢測樣品孔、空白對照孔（陰性對照）共三組，同時進(jìn)行檢測，分別進(jìn)行三次平行實(shí)驗(yàn)。
4. 混勻離心、上機(jī)進(jìn)行熒光定量PCR（儀器為Roche：LC96）。
PCR程序：

5.保存數(shù)據(jù)，判斷樣本質(zhì)量：
（1）檢測樣品與標(biāo)準(zhǔn)品之間的Ct值差
（2）檢測樣品與標(biāo)準(zhǔn)品之間的熒光強(qiáng)度差
檢測結(jié)果需達(dá)到：以上兩組檢測指標(biāo)無顯著性差異
注意事項(xiàng)
該產(chǎn)品*于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
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