犬白細胞介素6（IL-6）檢測原理！

犬白細胞介素6（IL-6）檢測原理！

白細胞介素-6是趨化因子家族的一種細胞因子。白細胞介素interleukin 縮寫為IL，功能關(guān)系免疫反應(yīng)的表達和調(diào)節(jié)，這種調(diào)節(jié)有來源于淋巴細胞或巨噬細胞等的許多因子參與。白細胞介素是由多種細胞產(chǎn)生并作用于多種細胞的一類細胞因子。由于初是由白細胞產(chǎn)生又在白細胞間發(fā)揮作用，所以由此得名，現(xiàn)仍一直沿用。

產(chǎn)品名稱：犬白細胞介素6（IL-6）ELISA檢測試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：96T

儲存條件：2-8℃，避光防潮保存。

有效期：6個月

檢測原理：試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被犬白細胞介素6（IL-6）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的犬白細胞介素6（IL-6）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

實驗步驟（僅供參考）

1.  從室溫平衡60min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.  待測樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；

4.  隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

樣本收集、處理及保存方法：

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。