糖原合成酶（Glycogen synthase，GCS）試劑盒說明書

測定意義：
GCS（ EC 2.4.1.11 ）催化 UDPG 和葡萄糖殘基生成糖原和 UTP，以 α-1，4-糖苷鍵相連延長
糖鏈，是肝和肌肉糖原合成酶的限速酶，是胰島素作用的主要靶酶，對糖代謝的調(diào)節(jié)和血糖
穩(wěn)態(tài)的維持具有重要作用。
測定原理：
GCS 催化 UDPG 和葡萄糖殘基生成糖原和 UDP，丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進(jìn)一步依次催化
NADH 氧化生成 NAD + ，在 340nm下測定 NADH 下降速率，即可反映 GCS 活性。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：60mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 45 mL×1 瓶， 4℃保存；
試劑二：液體 5mL×1 瓶，4℃保存；
試劑三：液體 41μL×1 支，4℃保存；
試劑四：粉劑×1 支， -20℃保存；
試劑五：粉劑×1 瓶， -20℃保存；
樣本的前處理：
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL
提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟：
1、 分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 工作液的配制：臨用前將試劑三和試劑四轉(zhuǎn)移到試劑一中混合溶解待用；用不完的試劑
分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
3、 試劑五的配制：臨用前在試劑五瓶中加入 2.5mL 試劑二充分溶解待用；用不完的試劑分
裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
4、 將工作液和試劑五置于 37℃預(yù)熱 5 分鐘。
5、 在 1mL 石英比色皿中加入 50μL 樣本、50μL 試劑五和 900μL 工作液，立即混勻，記錄
340nm 處初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2，計算 ΔA=A1-A2。
注意：在該試劑盒中，若 ΔA 大于 0.1，需將樣本用提取液稀釋適當(dāng)倍數(shù)后測定，使 ΔA 小
于 0.1 可提高檢測靈敏度。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。