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內源性過氧化物酶阻斷劑是用于免疫組織化學(IHC)實驗中的一種試劑,主要用于阻斷組織樣本中內源性過氧化物酶的活性,以避免其在后續(xù)染色步驟中產生非特異性信號,影響實驗結果。
作用機制
內源性過氧化物酶(如辣根過氧化物酶,HRP)在某些組織(如紅細胞、白細胞、肝臟和腎臟)中天然存在。在IHC實驗中,使用HRP標記的二抗進行顯色反應時,這些內源性酶會與底物反應,導致背景染色增強,干擾目標蛋白的特異性檢測。阻斷劑通過抑制內源性過氧化物酶的活性,減少非特異性信號。
常用阻斷劑
過氧化氫(H?O?):
常用濃度為0.3%-3%,溶于甲醇或水。
通過氧化作用抑制內源性過氧化物酶活性。
處理時間通常為10-30分鐘。
疊氮鈉(NaN?):
常用濃度為0.1%-1%。
通過抑制酶活性來阻斷內源性過氧化物酶。
處理時間通常為10-30分鐘。
甲醇-H?O?溶液:
甲醇與H?O?混合,常用比例為0.3% H?O?溶于甲醇。
同時阻斷內源性過氧化物酶和部分內源性生物-素。
使用步驟
組織切片脫蠟、水化。
用阻斷劑(如3% H?O?)孵育10-30分鐘。
用緩沖液(如PBS)清洗切片,去除殘留阻斷劑。
進行后續(xù)IHC染色步驟。
注意事項
濃度與時間:阻斷劑濃度過高或時間過長可能破壞組織抗原。
組織類型:不同組織內源性過氧化物酶含量不同,需優(yōu)化條件。
試劑選擇:根據(jù)實驗需求選擇合適的阻斷劑。
內源性過氧化物酶阻斷劑
僅供科研實驗用,不做其他用途!
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