探針法人型支原體實時定量PCR試劑盒

Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Mycoplasma Hominis

貨號：Mqt-hom-20      規(guī)格：20個反應(yīng)

貨號：Mqt-hom-50      規(guī)格：50個反應(yīng)

貨號：Mqt-hom-100     規(guī)格：100個反應(yīng)

儲存：-20度，避光保存，保質(zhì)期一年。避免反復(fù)凍融。

試劑盒特點：

1，特異性檢測人型支原體，與其他生物基因組沒有交叉反應(yīng)。

2，靈敏度高，最-低檢測極限為每反應(yīng)7個拷貝。

3，使用的DNA聚合酶具有抗抑制能力強和熱穩(wěn)定性好的特點；采用熱啟動方式，可抑制非特異性擴增，降低背景熒光。

4，帶有陽性對照樣品，可用于檢驗試劑盒有效性。

5，帶有UDG酶和dUTP，可降低殘留DNA的污染。

人型支原體（Mycoplasma Hominis）是一種多形性革蘭氏陰性菌，可呈球形、絲狀和不規(guī)則形狀，最小直徑約80至100納米，最大直徑約0.5至1微米，平均直徑約0.2至0.3微米，是一種人類常見的條件性支原體，可發(fā)現(xiàn)于人類和靈長類動物。人型支原體可作為共生菌生活在泌尿生殖道，在呼吸道也可發(fā)現(xiàn)其存在。它在宿主中營寄生和腐生生活，能引起多種感染，如：盆腔-炎癥，流產(chǎn)后發(fā)熱，產(chǎn)后發(fā)熱，免疫抑制人群的外生殖器感染，以及新生兒的腦膜炎、肺炎和膿腫等。人型支原體有三種能量產(chǎn)生途徑，包括糖酵解、精氨酸水解和核黃素代謝。

體外培養(yǎng)法是傳統(tǒng)的人型支原體檢測方法，但這個方法相對較慢，需2-5天時間，靈敏度較低，容易受到其他微生物的污染，有時需要繁瑣的顯微觀察。這些缺點往往造成嚴(yán)重的時間浪費。而PCR法用于檢測人型支原體，則有更高的靈敏度和更好的特異性，不受其他微生物污染的影響，且檢測時間短，僅需幾個小時即可獲得結(jié)果。定量PCR法與常規(guī)PCR法相比，不僅可以進行定量分析，而且操作更為方便，更少受環(huán)境污染的影響。

本試劑盒選擇高度保守的膜蛋白移位酶基因作為靶點，可以特異性識別人型支原體，經(jīng)BLAST驗證，與其他生物基因組沒有交叉反應(yīng)。檢測13種支原體和31種細(xì)菌，無特異性反應(yīng)。在153個泌尿生殖道樣品中，檢測出108個人型支原體陽性，而培養(yǎng)法第一次檢測出98個陽性，用凍存樣本重復(fù)檢測后證實另10個也為陽性，可見本試劑盒靈敏度高于培養(yǎng)法。以gap基因和16S rRNA基因為靶點的PCR方法，由于這兩個基因在靶點區(qū)域有一些小的突變，導(dǎo)致一些菌株不能識別或靈敏度降低，而本試劑盒的靶點區(qū)域，經(jīng)數(shù)十個菌株的測序證實不包含突變。本試劑盒適用于人型支原體的檢測和鑒定。

本試劑盒包含熱啟動DNA聚合酶、dNTP（以dUTP代替dTTP）、引物、探針、陽性對照品、ROX染料，和用以防止殘余DNA污染的UDG（Uracil-?DNA?Glycosylase，尿嘧啶-DNA-糖基酶），用戶只需準(zhǔn)備好DNA樣品即可使用。

本試劑盒采用的DNA聚合酶源自極-端嗜熱菌（Thermus thermophilus），經(jīng)改造后較普通的Taq酶具有更強的抗抑制能力和熱穩(wěn)定性。通過結(jié)合特異性單克隆抗體，在室溫下DNA聚合酶活性被抑制。在PCR循環(huán)的熱變性階段，抗體受熱被去除，此時DNA聚合酶活性恢復(fù)，因此獲得“熱啟動"功能。熱啟動可減少殘余DNA的污染，提高PCR擴增效率、靈敏度和目的片段產(chǎn)量。

UDG和dUTP可以阻止前次步驟殘余DNA的擴增。dUTP可以確保擴增后的DNA中均含有尿嘧啶。UDG可從單鏈或雙鏈DNA上去除尿嘧啶殘基，從而阻止含有尿嘧啶的DNA作為下幾輪PCR的模板。在PCR循環(huán)開始前的UDG孵育步驟，可以破壞帶有尿嘧啶的PCR產(chǎn)物。經(jīng)過該去除污染步驟后，UDG在正常的PCR循環(huán)過程中被高溫滅活，對PCR反應(yīng)沒有影響。

本產(chǎn)品僅供研究使用。

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