探針?lè)ㄘ堁гw實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒

Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Mycoplasma haemofelis

貨號(hào)：Mqt-hfe-20      規(guī)格：20個(gè)反應(yīng)

貨號(hào)：Mqt-hfe-50      規(guī)格：50個(gè)反應(yīng)

貨號(hào)：Mqt-hfe-100     規(guī)格：100個(gè)反應(yīng)

儲(chǔ)存：-20度，避光保存，保質(zhì)期一年。避免反復(fù)凍融。

試劑盒特點(diǎn)：

1，特異性檢測(cè)貓血支原體和犬血支原體，不受其他基因組干擾。

2，靈敏度高，最-低可檢出反應(yīng)液中的2個(gè)基因組。

3，使用的DNA聚合酶具有抗抑制能力強(qiáng)和熱穩(wěn)定性好的特點(diǎn)；采用熱啟動(dòng)方式，可抑制非特異性擴(kuò)增，降低背景熒光。

4，帶有陽(yáng)性對(duì)照樣品，可用于檢驗(yàn)試劑盒有效性。

5，帶有UDG酶和dUTP，可降低殘留DNA的污染。

嗜血支原體可以感染很多哺乳動(dòng)物，包括貓、犬、豬、牛、羊等，也包括人類。貓血支原體（Mycoplasma haemofelis），或稱為貓嗜血支原體、貓附紅細(xì)胞體，寄生于貓紅細(xì)胞表面，具多形性，可呈現(xiàn)為球狀、環(huán)狀或桿狀，對(duì)紅細(xì)胞有破壞作用，可引起傳染性溶血貧血癥，有時(shí)呈急性發(fā)作，可致命；有時(shí)呈慢性發(fā)作，出現(xiàn)嗜睡、厭食、粘膜慘白及黃疸、發(fā)燒、脾臟腫大等癥狀，并可能出現(xiàn)反復(fù)發(fā)作。其傳播途徑為血液傳播，包括：吸血昆蟲(chóng)叮咬、咬傷、輸血等。

目前已知寄生于貓血中的支原體有三種：貓血支原體，Candidatus Mycoplasma haemominutum和Candidatus Mycoplasma turicensis。在PCR技術(shù)出現(xiàn)之前，這三種支原體被統(tǒng)稱為貓血巴爾通氏體（Haemobartonella felis）。這些細(xì)菌粘附在紅細(xì)胞表面生長(zhǎng)，有時(shí)會(huì)給宿主造成一些疾病，尤其是在貓免疫力下降的時(shí)候。有報(bào)道約14%的貧血貓呈血液支原體陽(yáng)性。貓血支原體的致病能力強(qiáng)于另兩種支原體。這三種支原體常發(fā)生雙重或三重感染，貓血支原體往往是檢出拷貝數(shù)最少的，因此需要單獨(dú)的檢測(cè)方法排除另兩種支原體的干擾。

寄生于犬血中的支原體有兩種：犬血支原體（Mycoplasma haemocanis，或稱犬嗜血支原體，犬附紅細(xì)胞體，舊稱Haemobartonella canis)和Candidatus Mycoplasma haematoparvum。犬血支原體與貓血支原體親緣關(guān)系非常近，形態(tài)也類似，基因組幾乎*相同。在實(shí)驗(yàn)條件下，貓可以感染犬血支原體，而犬不能感染貓血支原體。犬血支原體可能的臨床表現(xiàn)有：無(wú)癥狀、脫水、輕度貧血、心跳過(guò)速、黃疸、死亡，但是很少引起明顯的溶血，除非是做了脾切除手術(shù)或者發(fā)生了免疫抑制。犬血支原體是犬類中最常見(jiàn)的嗜血支原體，分布極為廣泛，陽(yáng)性率大約在0.5-40%之間。

嗜血支原體無(wú)法在體外培養(yǎng)，因此難以開(kāi)發(fā)蛋白類檢測(cè)方法。常用的檢測(cè)方法包括顯微鏡鏡檢法和PCR法。鏡檢法靈敏度低，實(shí)驗(yàn)誤差大，無(wú)法區(qū)分支原體種類，易受血液中其他物質(zhì)以及人工涂片方法的干擾，且支原體易從紅細(xì)胞表面脫落，造成漏檢。而PCR法在靈敏度上則有明顯的優(yōu)勢(shì)，且可以區(qū)分支原體種類。定量PCR法與普通PCR法相比，不僅可以進(jìn)行定量分析，而且操作更為方便，更少受環(huán)境污染的影響。

本試劑盒基于16S rRNA基因的保守區(qū)域，設(shè)計(jì)特異性引物和探針，可以準(zhǔn)確識(shí)別貓血支原體和犬血支原體，與Candidatus Mycoplasma haemobos有微弱的交叉反應(yīng)。Candidatus Mycoplasma haemobos寄生于牛血中，不會(huì)對(duì)本試劑盒的檢測(cè)產(chǎn)生影響。對(duì)1585個(gè)貓血樣品進(jìn)行檢測(cè)，獲得45個(gè)陽(yáng)性，其中有25個(gè)為與另兩種貓嗜血支原體共感染。本試劑盒適用于對(duì)貓血支原體和犬血支原體的檢測(cè)。

本試劑盒包含熱啟動(dòng)DNA聚合酶、dNTP（以dUTP代替dTTP）、引物、探針、陽(yáng)性對(duì)照品、ROX染料，和用以防止殘余DNA污染的UDG（Uracil-?DNA?Glycosylase，尿嘧啶-DNA-糖基酶），用戶只需準(zhǔn)備好DNA樣品即可使用。

本試劑盒采用的DNA聚合酶源自極-端嗜熱菌（Thermus thermophilus），經(jīng)改造后較普通的Taq酶具有更強(qiáng)的抗抑制能力和熱穩(wěn)定性。通過(guò)結(jié)合特異性單克隆抗體，在室溫下DNA聚合酶活性被抑制。在PCR循環(huán)的熱變性階段，抗體受熱被去除，此時(shí)DNA聚合酶活性恢復(fù)，因此獲得“熱啟動(dòng)"功能。熱啟動(dòng)可減少殘余DNA的污染，提高PCR擴(kuò)增效率、靈敏度和目的片段產(chǎn)量。

本產(chǎn)品僅供研究使用。

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