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反相離子對色譜法建立的注意事項（四）
大家看過之前的文章后，對反相離子對色譜法已經(jīng)有很清晰的認(rèn)識了，今天小編為大家分享一個實際案例：
甲酰胺等6種物質(zhì)的分離
初始條件
色譜柱：Ultimate® LP-C18（4.6×250mm，5μm）。
流動相：0.1%七氟丁酸溶液/乙腈；
檢測波長：210nm；
柱溫：30℃；
流速：1mL/min；
進(jìn)樣量：10μL。
色譜圖
討論：
甲酰肼與4-氨基三氮唑合并，3-氨基三氮唑峰前有倒峰干擾，三氮唑峰型不好，甲酰胺與二甲酰肼分離度未基線分離，增加離子對試劑濃度。
流動相：0.3%七氟丁酸溶液/乙腈
色譜圖
討論：
增加離子對試劑濃度分離效果和基線都得到很好的改善，但約9分鐘處有倒峰，甲酰胺與二甲酰肼分離度未基線分離，增加離子對試劑中碳原子的數(shù)量。
流動相：10mmol/L KH2PO4(含1g/L辛烷磺酸鈉，pH1.6)/乙腈=85/15
色譜圖
討論：
改用辛烷磺酸鈉以后無改善，改變離子對試劑種類。
流動相：10mmol/L KH2PO4(含2g/L己烷磺酸鈉，pH1.5)/乙腈=90/10
色譜圖
討論：
第一，二個峰分離良好，其他物質(zhì)需要改善，調(diào)整有機相的比例。
流動相：10mmol/L KH2PO4(含2g/L己烷磺酸鈉，pH1.5)/乙腈=95/5
色譜圖
測試結(jié)果：
保留及分離情況均良好，分離*，三氮唑峰形能滿足峰面積定量要求。
討論：
在分離甲酰胺等6個物質(zhì)時，這幾個均為極性較大，反相色譜上保留弱，要達(dá)到六個成分的分離，首先需增加其保留，再根據(jù)情況，調(diào)整離子對試劑的量，pH值，有機相種類與濃度以達(dá)到分離，在實驗中選擇了耐受強酸條件的Ultimate® LP-C8（pH耐受范圍0.5-8）柱，通過調(diào)整離子對試劑的種類，濃度，有機相的比例，使得各物質(zhì)得到良好的分離，滿足日常檢測需求。