青島普瑞邦生物工程有限公司

液相色譜法檢測牛奶,奶粉等產品中黃曲霉毒素M1操作規(guī)程

時間:2019/3/27閱讀:1646

1. 儀器

液相色譜儀配熒光檢測器,震蕩器(或高速攪拌器),高速離心機

 

2. 試劑與試液

色譜甲醇,蒸餾水,乙腈+水(25+75),石油醚,2.5 10%乙腈, 氫氧化鈉溶液(0.5mol/L),玻璃纖維濾紙(PriboFast免疫親和柱免費贈送)

 

3. 測定法

本法系用液相色譜法(GB/T 18980-2003)測定牛奶,奶粉等產品中的黃曲霉毒素M1,除另有規(guī)定外,按下列方法測定。

3.1 色譜條件

色譜柱:C18柱,150×4.6mm,5um

檢測器:熒光檢測器;激發(fā)波長365nm,發(fā)射波長435nm;

流動相:乙腈-水(25:75)

流  速:1.0ml/min

進樣量:20ul

柱  溫:室溫

3.2  標準品溶液的配制

取黃曲霉毒素M1標準品,用乙腈稀釋成0.5ug/ml的標準儲備液。根據使用需要,準確吸取10μl、20μl、50μl、100μl、200μl的黃曲霉毒素標準儲備液,置5ml的容量瓶中,用流動相稀釋至刻度,配成相當于1ng/ml、2g/ml、5ng/ml、10g/ml、20ng/ml的標準工作液,即得。

3.3  樣品前處理

3.3.1牛奶

將100mL牛奶水浴加熱至40℃;

4000r/min離心15min,收集50mL清澈液待用;

3.3.2乳粉和粉狀嬰幼兒配方食品

稱取10g奶粉樣品,將100mL50℃水多次少量加入,攪拌,使奶粉充分溶解;

6000r/min離心15min,收集50mL清澈液待用;

3.3.3發(fā)酵乳(包括固體狀、半固體狀和帶果肉型)

稱取60 g混勻的試樣,用0.5 mol/L 的氫氧化鈉溶液在酸度計指示下調pH至7.4;

用高速均質器在 9500 轉/分鐘,高速勻漿5 min

水浴加熱至40℃;

4000r/min離心15min,收集50mL清澈液待用

3.3.4干酪

稱取經切細、過10目圓孔篩混勻的試樣5g置于50 mL離心管中,加2 mL水和30 mL甲醇;

用高速均質器在 9500r/分鐘,高速勻漿5 min;

超聲提取30 min;

在6000r/分鐘下離心15 min,收集上清液并移入250 mL分液漏斗中。

在分液漏斗中加入30 mL石油醚,振搖2 min;

待分層后,將下層移于50 mL燒杯中,棄去石油醚層。

重復用石油醚提取2次;。

將下層溶液移到100 mL圓底燒瓶中,減壓濃縮至約2 mL;

濃縮液倒入離心管中,燒瓶用乙腈-水溶液(1+4) 5 mL分2次洗滌,洗滌液一并倒入50 mL離心管中;

加水稀釋至約50 mL,在6000 轉/分鐘下離心 5 min,上清液供凈化處理。

3.3.5奶油

稱取5g試樣,置于50 mL燒杯中;

用20 mL石油醚將其溶解并移于250mL具塞錐形瓶中。

加20 mL水和30 mL甲醇,振蕩30 min后,將全部液體移于分液漏斗中;

待分層后,將下層溶液全部移到100 mL圓底燒瓶中,在旋轉蒸發(fā)儀中減壓濃縮至約5 mL,加水稀釋至約50mL,供凈化處理。

3.4  供試品溶液的制備

3.4.1 PriboFast® 黃曲霉毒素M1免疫親和柱的操作

將免疫親和柱連接于50.0mL玻璃注射器下。準確移取50.0mL凈化溶液注入玻璃注射器;

將空氣壓力泵與注射器連接,調節(jié)壓力使溶液以約2-3mL/min流速緩慢通過免疫親和柱,直至2~3mL空氣通過柱體;

更換10ml注射器與親和柱連接,在注射器中加入10ml水,調節(jié)壓力使水以約6mL/min流速清洗親和柱。

準確加入4mL色譜級乙腈洗脫,流速為1 mL/min~2mL/min,收集全部洗脫液于玻璃試管中,供檢測用。(建議將乙腈的量分2-4次加入。每次加入后,要讓甲醇充分浸泡柱子里的凝膠2分鐘。洗脫后的乙腈溶液,建議水浴30℃加熱吹近干。用10%乙腈定容后上液相)

3.5 測定

精密量取1ng/ml、2g/ml、5ng/ml、10g/ml、20ng/ml的標準工作液各20ul,注入液相色譜儀,測定峰面積,以峰面積為縱坐標,濃度為橫坐標,繪制標準曲線。另精密量取供試品溶液20ul,注入液相色譜儀,測定峰面積,從標準曲線上讀出供試品中相當于黃曲霉毒素M1的量,計算,即得。

 

1.本實驗應有相應的安全、防護措施,并不得污染環(huán)境。

2.殘留有黃曲霉毒素M1的廢液或廢渣的玻璃器皿,應置于貯存容器(裝有10%氯酸鈉溶液)內,浸泡24小時以上,再用清水將玻璃器皿沖洗干凈。

 

 

 

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