深度解析化學(xué)免疫發(fā)光分析儀的工作原理
　　化學(xué)發(fā)光標記免疫分析，別稱：化學(xué)發(fā)光免疫分析(CLIA ) ,是用化學(xué)發(fā)光劑直接標記抗原或抗體的免疫分析儀器。
　　化學(xué)免疫發(fā)光分析儀包含兩個部分， 即免疫反應(yīng)系統(tǒng)和化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)。
　　原理：利用化學(xué)發(fā)光物質(zhì)經(jīng)催化劑的催化和氧化劑的氧化， 形成一個激發(fā)態(tài)的中間體， 當這種激發(fā)態(tài)中間體回到穩(wěn)定的基態(tài)時，同時發(fā)射出光子(hM) , 利用發(fā)光信號測量儀器測量光量子產(chǎn)額。免疫反應(yīng)系統(tǒng)是將發(fā)光物質(zhì)（在反應(yīng)劑激發(fā)下生成激發(fā)態(tài)中間體）直接標記在抗原（化學(xué)發(fā)光免疫分析） 或抗體（免疫化學(xué)發(fā)光分析） 上， 或酶作用于發(fā)光底物。
　　化學(xué)免疫發(fā)光分析儀中核心探測器件為光電倍增管（PMT），由單光子檢測并傳輸至放大器，并加高壓電流放大，放大器將模擬電流轉(zhuǎn)化為數(shù)字電流，數(shù)字電流將發(fā)光信號由R232數(shù)據(jù)線傳輸給電腦并加以計算，得出臨床結(jié)果。
　　學(xué)發(fā)光標記免疫分析又稱化學(xué)發(fā)光免疫分析(CLIA ) ,是用化學(xué)發(fā)光劑直接標記抗原或抗體的免疫分析方法。常用于標記的化學(xué)發(fā)光物質(zhì)有吖啶酯類化合物——acridinium ester (AE) ,是有效的發(fā)光標記物 , 其通過起動發(fā)光試劑作用而發(fā)光, 強烈的直接發(fā)光在一秒鐘內(nèi)完成,為快速的閃爍發(fā)光。吖啶酯作為標記物用于免疫分析, 其化學(xué)反應(yīng)簡單、快速、無須催化劑; 檢測小分子抗原采用競爭法 ,大分子抗原則采用夾心法 , 非特異性結(jié)合少, 本底低; 與大分子的結(jié)合不會減小所產(chǎn)生的光量, 從而增加靈敏度。
　　發(fā)光酶免疫分析法
　　從標記免疫分析角度, 化學(xué)發(fā)光酶免疫分析( chemi luminescent enzyme immuno assay, CLEIA ) , 應(yīng)屬酶免疫分析, 只是酶反應(yīng)的底物是發(fā)光劑,操作步驟與酶免分析*相同: 以酶標記生物活性物質(zhì)(如酶標記的抗原或抗體) 進行免疫反應(yīng),免疫反應(yīng)復(fù)合物上的酶再作用于發(fā)光底物,在信號試劑作用下發(fā)光, 用發(fā)光信號測定儀進行發(fā)光測定。目前常用的標記酶為辣根過氧化物酶(HRP) 和堿性磷酸酶(ALP) ,它們有各自的發(fā)光底物。
　　發(fā)光試劑
　　HRP標記的CLEIA常用的底物為魯米諾(32氨基鄰苯二甲酰肼,luminol) ,或其衍生物如異魯米諾(42氨基鄰苯二甲酰肼) ,是一類重要的發(fā)光試劑。魯米諾的氧化反應(yīng)在堿性緩沖液中進行,在過氧化物酶及活性氧存在下,生成激發(fā)態(tài)中間體, 當其回到基態(tài)時發(fā)光, 其波長為425nm。
　　早期用魯米諾直接標記抗原(或抗體) ,但標記后發(fā)光強度降低而使靈敏度受到影響。近來用過氧化物酶標記抗體, 進行免疫反應(yīng)后利用魯米諾作為發(fā)光底物, 在過氧化物酶和起動發(fā)光試劑作用下, 魯米諾發(fā)光, 發(fā)光強度依賴于酶免疫反應(yīng)物中酶的濃度。