磁珠法核酸提取過程中常見的誤區(qū)有哪些

磁珠法核酸提取過程中常見的誤區(qū)有哪些

使用生物磁珠提取核酸，在國內(nèi)還屬于較為新穎的核酸提取方式，相比于傳統(tǒng)的氯F異五醇抽提法和離心柱試劑盒法，這種方法還有很多人不慎了解，在使用磁珠法提純核酸的過程中，也存在著一些誤區(qū)。

誤區(qū)一：磁珠使用越多，提取效果越好

提取效果不佳時，實驗人員會考慮增加磁珠的用量，認(rèn)為磁珠多加一點，可以吸附更多的核酸，但這種想法是不可取的。

磁珠的主要特點是既可以分散于液體中，也可以在外加磁場作用下使固液相分離，試劑體系，磁珠和液體的比例都應(yīng)該是有一定閾值的，超過一定的比例，過多的磁珠將因為無法均勻分散于液體中，而喪失其分散的特性，也使得洗滌過程中無法充分增加核酸磁珠和液體接觸的效率。而過量的磁珠也會吸附更多的雜質(zhì)，對于除雜的效果影響非常大。甚至有些時候，過多的磁珠會吸附蛋白酶、溶菌酶等在液體體系中起主要作用的功能成分，導(dǎo)致整個試劑盒效率低下。有很多時候，在提取效果不佳的時候，減少磁珠使用量，反而是提升提取效果的好途徑。

誤區(qū)二：試劑使用的越多，提取效果越好

裂解效果不好？增加裂解液使用量。這是很多客戶在使用試劑盒中的慣性思維，但是對于磁珠法而言，每增加一部分液體體積，減少了更多的磁珠碰撞幾率，而降低磁珠碰撞幾率，會導(dǎo)致吸附率的大幅度下降。所以很多時候，雖然增加裂解液和洗滌液確實能夠起到增強裂解和增強洗滌的作用，但磁珠法提取的核心是磁珠吸附核酸的效率，無法保證磁珠碰撞效率是不能保證核酸提取效率的，所以單純增加試劑使用量改善提取效果并不一定有效。

誤區(qū)三：洗滌次數(shù)越多，提取效果越好

提取得到的核酸雜質(zhì)過多時，使用者會考慮多進行幾次洗滌，以得到更為純凈的核酸。增加洗滌次數(shù)確實有利于提純核酸，但考慮到每次洗滌都會損失一定量的核酸，且增加了核酸斷裂的可能性，所以一般來說洗滌次數(shù)控制在2~4次為宜。

誤區(qū)四：樣本取用的越多，提取效果越好

在樣本不夠新鮮或者核酸含量本身很少的情況下，往往核酸提取效果不好，會采用多取樣本的方式增加核酸提取量。但簡單地增加樣本取樣量，有時會引入過多的雜質(zhì)，超出裂解液裂解能力，也會使提取效率降低，所以并不推薦通過簡單的增加樣本取樣量的方式來達到增加提取量的目的。

如果確實是由于樣本量不足而引起的提取量過低，建議在前處理先經(jīng)過富集或者濃縮步驟再開始提取；或者增加裂解的性，使更多的核酸暴露出來也是一種解決方法。

誤區(qū)五：某一種磁珠好，應(yīng)該在所有實驗中效果都好

磁珠的種類是多種多樣的，粒徑大小不同，分散性不同，磁響應(yīng)時間不同，包被基礎(chǔ)基質(zhì)不同，外層修飾官能團不同，包被密度不同，官能團臂長不同，會導(dǎo)致磁珠特性千差萬別，所以不同磁珠所適應(yīng)的實驗和體系也是不同的。像同樣是核酸提取的試劑，配方也并不相同，同樣應(yīng)用于核酸提取的磁珠，性質(zhì)也并非一致。

有的磁珠在常量核酸提取中表現(xiàn)出了更高的吸附效率，有的磁珠更適用于微量核酸提取，有的磁珠適合偏酸性系列的試劑體系，有的磁珠適合偏堿性系列的試劑體系，有的磁珠磁響應(yīng)性好但是沉降速度快，有的磁珠沉降速度慢但是磁響應(yīng)時間長。很少有一種磁珠能適用于所有實驗的情況，除了固定的試劑盒配合，多數(shù)情況下，磁珠和試劑體系都要做一定時間的配合調(diào)整。

誤區(qū)六：和某種試劑盒對比效果不好，是磁珠不好

很多客戶在篩選磁珠過程中都是在已經(jīng)成熟試劑體系下，簡單地等量替換磁珠，用于比較磁珠效果。這樣會很容易得出某種磁珠效果不好的結(jié)論，但實際上，由于不同磁珠適合的體系和用量是不同的，往往需要調(diào)整過后才能獲得更好的提取效果。