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細(xì)胞培養(yǎng)中培養(yǎng)基的作用

時(shí)間:2022-1-13閱讀:1719
1.液體培養(yǎng)基貯存于4℃ 冰箱,避免光照,實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前放在37℃ 水槽中溫?zé)帷?S'、


2.液體培養(yǎng)基(加血清)存放期為六個(gè)月,期間glutamine可能會(huì)分解,若細(xì)胞生長(zhǎng)不佳
可以再添加適量glutamine。
3.粉末培養(yǎng)基配制(以1升為例):
3.1.細(xì)胞培養(yǎng)基通常須添加10%血清,因此粉末培養(yǎng)基之配制體積為900ml,pH為7.2-7.4。NaHCO3為另外添加,若將NaHCO3粉末直接加入液體培養(yǎng)基中會(huì)造成pH之誤差,或局部過(guò)堿。因此粉末培養(yǎng)基及NaHCO3粉末應(yīng)分別溶解后才混合,然后用CO2氣體調(diào)整pH,而非用強(qiáng)酸(HCl)或強(qiáng)堿(NaOH),因?yàn)槁入x子對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)可能有影響,且貯存時(shí)培養(yǎng)基的pH易發(fā)生改變。生物3.2.材料:純水(milli-Q水或二次至三次蒸餾水,水品質(zhì)非常重要),粉末培養(yǎng)基,NaHCO3
電磁攪拌器,無(wú)菌血清瓶,0.1或0.2mm無(wú)菌過(guò)濾膜,pH計(jì),真空泵,CO2氣體。
3.3.步驟:
3.3.1.取粉末培養(yǎng)基溶于700mlmilli-Q水中,攪拌使其溶解。
3.3.2.稱取適量之NaHCO3粉末溶于200mlmilli-Q水中,攪拌使其溶解,然后通入CO2氣體至飽和,約3-5分鐘。
3.3.3.將溶解且含飽和CO2之NaHCO3溶液加入溶解之液體培養(yǎng)基中混合?;旌笕芤褐畃H應(yīng)為7.2-7.4,除非pH值偏差太大,否則不需用酸堿再調(diào)整之。若為太堿,可再通入CO2氣體調(diào)整pH。培養(yǎng)基以真空幫浦通過(guò)過(guò)濾膜時(shí),pH會(huì)升高0.1-0.2。
3.3.4.以0.1或0.2mm無(wú)菌過(guò)濾膜過(guò)濾滅菌,同時(shí)分裝至無(wú)菌容器中,標(biāo)示培養(yǎng)基種類、日期、瓶號(hào)等,貯存于4℃。(血清亦可加入培養(yǎng)基中一起過(guò)濾)
3.3.5.配制之培養(yǎng)基配制須作生長(zhǎng)試驗(yàn)與污染測(cè)試。



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