了解一下激光共焦顯微鏡的發(fā)展背景

閱讀：267發(fā)布時間：2020-5-13

　　激光共焦顯微鏡是20世紀80年代中期發(fā)展起來并得到廣泛應用的新技術，它是激光、電子攝像和計算機圖像處理等現(xiàn)代高科技手段滲透，并與傳統(tǒng)的光學顯微鏡結合產(chǎn)生的先進的細胞分子生物學分析儀器，在生物及醫(yī)學等領域的應用越來越廣泛，已經(jīng)成為生物醫(yī)學實驗研究的*工具。

　　傳統(tǒng)熒光顯微鏡使用熒光物質標志細胞中的特定結構，不僅圖像與背景的對比度增強，而且由于許多熒光顯微鏡的光源使用短波長的紫外光，大大提高了分辨率(δ=0.61·λ/NA，其中δ為顯微鏡的分辨率;λ為照明光線的波長;NA為物鏡的數(shù)值孔徑)。

　　但當所觀察的熒光標本稍厚時，傳統(tǒng)熒光顯微鏡一個難以克服的缺點就顯現(xiàn)出來:焦平面以外的熒光結構模糊、發(fā)虛。原因是大多數(shù)生物學標本是層次區(qū)別的重疊結構(如耳蝸基底膜。

　　其實是外毛細胞、多種支持細胞、神經(jīng)纖維等組成的空間結構)，在普通光學顯微鏡下聚焦平面的變化，會表現(xiàn)出不同的形態(tài)。假若熒光標記的結構在不同層次上都有分布，且重疊在一起，反射熒光顯微鏡(epifluorescentmicroscope)不僅從焦平面上收集光量，而且來自焦平面上方或下方的散射熒光也被物鏡所接收，熒光顯微鏡的光學分辨率就要大大降低。

　　在傳統(tǒng)光學顯微鏡基礎上，激光掃描共聚焦顯微鏡用激光作為光源，采用共軛聚焦原理和裝置，并利用計算機對所觀察的對象進行數(shù)字圖像處理觀察、分析和輸出。

　　其特點是可以對樣品進行斷層掃描和成像，進行無損傷觀察和分析細胞的三維空間結構。

　　同時，利用免疫熒光標記和離子熒光標記探針，該技術不僅可觀察固定的細胞、組織切片,還可以對活細胞的結構、分子、離子及生命活動進行實時動態(tài)觀察和檢測，在亞細胞水平上觀察諸如CapH值，膜電位等生理信號及細胞形態(tài)的變化，成為形態(tài)學、分子細胞生物學、神經(jīng)科學、藥理學、遺傳學等領域中新一代強有力的研究工具，極大地豐富了人們對細胞生命現(xiàn)象的認識。

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