維生素K2（發(fā)酵法）液相色譜分析方法(衛(wèi)計(jì)委2016年第8號)

 

A.4 維生素K₂含量的測定

A.4.1試劑和材料

A.4.1.1維生素K₂標(biāo)準(zhǔn)品（七烯甲萘醌，MK-7）。

A.4.1.2異丙醇：分析純。

A.4.1.3甲醇：色譜純。

A.4.2儀器和設(shè)備

A.4.2.1液相色譜儀。

A.4.2.2紫外光檢測器：可變波長。

A.4.2.3數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)：色譜工作站或數(shù)據(jù)處理機(jī)。

A.4.3參考色譜條件

推薦的色譜柱及典型操作條件如下表A.1，其他能達(dá)到同等分離程度的色譜柱和色譜操作條件均可使用。

A.1色譜柱和色譜操作條件

色譜柱	C18 (ODS)柱，柱長150 mm，內(nèi)徑4.6mm，內(nèi)裝C18填充物，粒徑5μm或是相當(dāng)者
柱溫/℃	50
流動(dòng)相	甲醇
流速/ mL/min	1.0
檢測波長/nm	254
進(jìn)樣量/ μL	10

A.4.4分析步驟

A.4.4.1 試樣溶液處理

精密稱取試樣適量（至0.001 g）于10 mL容量瓶中，加入異丙醇超聲30 min，用異丙醇定容至刻度，搖勻，過0.45 μm濾膜，得上樣試樣。

A.4.4.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制

精密稱取七烯甲萘醌標(biāo)準(zhǔn)品適量，用異丙醇溶解并定容，配制成濃度為20 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

A.4.4.3  試樣測定

用標(biāo)準(zhǔn)品和試樣溶液10 µL注入液相色譜儀中測定，以保留時(shí)間定性，峰面積外標(biāo)法定量。

A.4.5結(jié)果計(jì)算

維生素K₂的含量w，單位為微克每克(μg/g)，按式（A.1）計(jì)算：

   ………………………………………………（A.1）

式中：

A₁——試樣中維生素K₂（七烯甲萘醌）對應(yīng)峰面積；

A₂——標(biāo)準(zhǔn)品中維生素K₂（七烯甲萘醌）對應(yīng)峰面積；

c₁——進(jìn)樣標(biāo)準(zhǔn)品中維生素K₂（七烯甲萘醌）的濃度，單位為微克每毫升（µg/mL）；

V₁——供試試樣定容體積，單位為毫升（mL）；

m₁——試樣的質(zhì)量，單位為克（g）。

試驗(yàn)結(jié)果以平行測定結(jié)果的算術(shù)平均值為準(zhǔn)。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的差值不大于算術(shù)平均值的10 %。

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